[發(fā)明專利]一種標準化、高精度、通用的功能模塊構建方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310377238.1
• 申請日: 2013-08-27
• 公開（公告）號: CN104419716B
• 公開（公告）日: 2017-12-29
• 發(fā)明（設計）人: 元英進;劉奪;李炳志;王霞;申明華;胡夢龍;杜昊星;蘇皖;宋田青;翟芳;郭雪嬌;郭睿
• 申請（專利權）人: 天津大學
• 主分類號: C12N15/66
• 分類號: C12N15/66;C12N15/63;C12N1/19
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司11227
• 代理人: 王學強

1.一種標準化、高精度、通用的功能模塊構建方法，包括如下步驟：

（1）將源基因添加具有酶識別與切割功能的標準化位點形成基因元件，將基因元件連入質粒pLD-Blunt中形成帶有基因元件的質粒，進行序列驗證；所述質粒pLD-Blunt的序列如SEQ ID NO.28所示；

（2）設計需要組合發(fā)揮功能的基因元件先后順序，按照設計的先后順序從帶有基因元件的質粒中利用所述標準化位點調取基因元件，利用Bsa1酶切割不同的模塊工具質粒，形成如下缺口：終止子1-啟動子-AATG-缺口-TAAA-終止子2；將調取的不同的基因元件連入缺口，構建出不同的功能模塊的質粒；所述不同的模塊工具質粒是由不同的模塊工具序列與空質粒pRS425K構成；所述模塊工具序列為終止子1-啟動子-AATGGGAGACC-紫色熒光蛋白基因amilCP的表達盒-GGTCTCCTAAA-終止子2；所述pRS425K的序列如SEQ ID NO.29所示；

（3）用下述兩種方式之一種進行:

方式一：從所述不同的功能模塊的質粒中利用酶切調取不同的功能模塊，與經過酶切的酵母質粒載體共轉化釀酒酵母，使不同的功能模塊組合在一起，構建出標準化、高精度、通用的功能模塊，存放于質粒中；

方式二：從所述不同的功能模塊的質粒中利用酶切調取不同的功能模塊，在第一個功能模塊之前設置有左側同源臂，在倒數(shù)第一個功能模塊之后設置有右側同源臂，共轉化釀酒酵母，使不同的功能模塊一同整合入酵母基因組，構建出標準化、高精度、通用的功能模塊，其存放于基因組中;

所述具有酶識別與切割功能的標準化位點是：GGTCTCN + AATG……基因……TAAA + NGAGACC；所述GGTCTCN與NGAGACC是Bsa1酶的識別位點。

2.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征是所述源基因是從天然生物中克隆的基因或人工合成的基因。

3.根據(jù)權利要求2所述的方法，其特征是所述從天然生物中克隆的基因為釀酒酵母基因Xks1，畢赤酵母基因Xyl1，畢赤酵母基因Xyl2。

4.根據(jù)權利要求2所述的方法，其特征是所述人工合成的基因為SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3所示。

5.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特點是所述不同的模塊工具序列中的終止子1，啟動子和終止子2的分組選取如表2：

表2：

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