[發明專利]MDM2基因受體改造的T細胞的制備方法

無效

• 申請號: 201310376897.3
• 申請日: 2013-08-26
• 公開（公告）號: CN103409373A
• 公開（公告）日: 2013-11-27
• 發明（設計）人: 凌丹彥;戴書縉;章萬古
• 申請（專利權）人: 上海易美生物技術有限公司
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;C12N15/867
• 代理公司: 上海智信專利代理有限公司 31002
• 代理人: 王潔;鄭暄

1.一種MDM2基因受體改造的T細胞的制備方法，包括如下步驟：

（1）將MDM2基因受體通過慢病毒載體轉染入培養成熟的單個核細胞CIK細胞；

（2）使表達MDM2受體的CIK細胞進行有效擴增得到M-CIK細胞，即獲得所述MDM2基因受體改造的T細胞。

2.根據權利要求1所述的MDM2基因受體改造的T細胞的制備方法，其特征在于，所述慢病毒載體用來表達一個由單鏈抗體、跨膜區域和一個細胞內信號區域聯結組成的MDM2基因受體。

3.根據權利要求1所述的MDM2基因受體改造的T細胞的制備方法，其特征在于，所述MDM2基因受體通過2A肽序列與多種共刺激受體CD28，4-1BBL和CD80相聯結。

4.根據權利要求1所述的MDM2基因受體改造的T細胞的制備方法，其特征在于，所述成熟的單個核細胞CIK細胞是指將人體外周血中提取的單個核細胞采用IFN-γ、IL-1α、IL-2、CD3單抗細胞因子刺激，培養成為成熟的CIK細胞。

5.根據權利要求4所述的MDM2基因受體改造的T細胞的制備方法，其特征在于，所述細胞因子IFN-γ、IL-1α、IL-2、CD3單抗的濃度分別為1000-2000U/ml、100-200U/ml、1000-2000U/ml、50-100ng/ml。

6.根據權利要求1所述的MDM2基因受體改造的T細胞的制備方法，其特征在于，所述有效擴增是指所得到的擴增細胞90%以上為有效M-CIK細胞，50ml外周血14天擴增細胞量在10¹⁰個以上。

7.根據權利要求6所述的MDM2基因受體改造的T細胞的制備方法，其特征在于，所述有效M-CIK細胞是指MDM2受體表達率在90%以上，CD3+表型在90%以上，CD3+CD56+表型在20%以上，對肺鱗癌細胞SK-MES-1的殺瘤率在90%以上，其中殺瘤率的效靶比為10:1。

8.一種M-CIK細胞，為根據權利要求1-7任一所述的MDM2基因受體改造的T細胞的制備方法制得。