[發明專利]一種具有抗腫瘤活性的裂片石莼硫酸多糖的制備方法

有效

• 申請號: 201310375318.3
• 申請日: 2013-08-26
• 公開（公告）號: CN103483460A
• 公開（公告）日: 2014-01-01
• 發明（設計）人: 邵平;秦敏樸;孫培龍
• 申請（專利權）人: 浙江工業大學
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00;A61K31/737;A61P35/00
• 代理公司: 杭州天正專利事務所有限公司 33201
• 代理人: 黃美娟;王曉普

技術領域

本發明涉及海洋藻類多糖的研究與開發，具體涉及一種具有抗腫瘤活性的裂片石莼硫酸多糖的制備方法及其應用，屬于海洋生物技術領域。

背景技術

海洋面積遼闊，海洋藻類植物來源豐富，海藻多糖正逐步成為生物多糖的主要來源之一。海藻多糖具有很高的藥用價值，在提高人體非特異性免疫功能、抗氧化、抗腫瘤、抗輻射、抗衰老、降血糖、降血脂方面具有顯著的作用。海藻多糖中的活性物質多為D-葡萄糖、D-甘露糖、D-半乳糖、D-葡萄糖醛酸等單糖組成的水溶性酸性、中性多糖。

目前多糖提取采用了不同的方法，包括溶劑提取法、酸提法、堿提法、微波法等。提取后粗多糖中蛋白質和色素的脫除同樣是其分離工程中的重要步驟之一。目前多糖脫除蛋白質和色素往往采用化學法，繼而采用軸向色譜DEAE層析進行分級純化，但存在產品產量低、耗時長、分離效率低、壓降大等缺點，特別對于海藻粘性多糖，軸向色譜分離易造成壓降大，效率低下。徑向流色譜是一種新型色譜分離純化技術，獨特的徑向流動設計，使其相對于傳統的軸向色譜，具有流速高、操作壓力低、線性放大等優勢。

裂片石莼屬于綠藻門、綠藻綱、石莼目、石莼科、石莼屬。石莼是重要的大型經濟藻類，廣泛分布于西太平洋沿海地區，在我國沿海均有分布，市場上價格便宜，其中含有的多糖多為粘性多糖，粘性系數高。

腫瘤嚴重威脅人類健康，臨床上治療該疾病的藥物，一般都是化學合成的抗腫瘤藥，通常具有一定的毒副作用。從植物、微生物及海洋生物中提取的天然藥物具有安全低毒副作用、生物相容性好、可生物降解的優點。近年來抗癌上市的新藥中，60%來自天然產物。多糖類化合物的活性存在一種間接的抗腫瘤活性，即由免疫體系傳遞的活性，因此毒性極小，不會對人體造成傷害。采用化學方法分離純化多糖往往反應條件劇烈，會導致多糖構象發生變化，活性基團易受破壞，產物質量不穩定等缺點，進而嚴重影響多糖生物活性。

公開號為CN200610026830.7公開了一種蜈蚣藻多糖提取物在制備抗腫瘤及其它藥物中的應用，但該方法只涉及蜈蚣藻粗多糖的提取，并沒有將其進行進一步的純化分離。公開號為CN101921346A公開了一種香菇菌絲體多糖的徑向流色譜分離方法，該方法提供了一種將徑向流色譜應用于粗多糖分離的方法。公開號為CN101709094A公開了一種超濾膜分離甜茶多糖的方法，該方法前期預處理需進行脫色素等步驟，且經過兩次不同規格的超濾膜超濾，才能獲得不同分子量多糖。

發明內容

本發明的內容在于提供一種具有抗腫瘤活性的裂片石莼硫酸多糖的制備方法，并提出所制得的石莼硫酸多糖可作為抗腫瘤藥物的新用途。

本發明的提取分離方法主要是超聲波水提醇沉獲得裂片石莼粘性粗多糖；徑向流色譜技術脫鹽脫蛋白；按照分子量大小超濾處理，分離出10KD至30KD裂片石莼多糖組分；再繼續經過徑向流離子交換分離多糖組分，獲得目的多糖產物。其中多糖目的產物具有明顯抗腫瘤活性。

本發明采用的技術方案是：

一種具有抗腫瘤活性的裂片石莼硫酸多糖的制備方法，所述方法包括以下步驟：

(1)將裂片石莼洗凈、干燥后粉碎，過100目篩，得顆粒均勻的粉碎物；

(2)稱取步驟(1)得到的粉碎物，加入質量為粉碎物60～70倍的蒸餾水，在400-500W的超聲條件下提取30～40分鐘，然后冷卻靜置（通常靜置1～2h），離心分離，取上清液a；

(3)將步驟(2)得到的上清液a旋轉蒸發濃縮至體積為原體積的10%～15%，加入體積分數95%的乙醇溶液使乙醇的終體積濃度為80%，靜置10～20小時，離心分離，所得沉淀冷凍干燥，得粗多糖a；

(4)將步驟(3)得到的粗多糖a加水配制成質量濃度5～10mg/ml的溶液，離心分離后，取上清液b過0.45μm微孔濾膜，得濾液b；

(5)將步驟(4)得到的濾液b加入裝填有弱堿性陰離子交換樹脂的徑向流色譜柱中進行脫色素脫蛋白，上樣后用蒸餾水洗脫，徑向流色譜的條件為：上樣流速/柱高為1-2ml/（min·cm），洗脫速度/柱高為8-12ml/（min·cm），洗脫至流出液不再發生苯酚-硫酸法顯色反應，表示洗脫完畢，收集所有洗脫液，濃縮、冷凍干燥得粗多糖b；