[發明專利]一種具有抗腫瘤活性的裂片石莼硫酸多糖的制備方法

有效

• 申請號: 201310375318.3
• 申請日: 2013-08-26
• 公開（公告）號: CN103483460A
• 公開（公告）日: 2014-01-01
• 發明（設計）人: 邵平;秦敏樸;孫培龍
• 申請（專利權）人: 浙江工業大學
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00;A61K31/737;A61P35/00
• 代理公司: 杭州天正專利事務所有限公司 33201
• 代理人: 黃美娟;王曉普

1.一種具有抗腫瘤活性的裂片石莼硫酸多糖的制備方法，其特征在于所述方法包括以下步驟：

(1)將裂片石莼洗凈、干燥后粉碎，過100目篩，得粉碎物；

(2)稱取步驟(1)得到的粉碎物，加入質量為粉碎物60～70倍的蒸餾水，在400-500W的超聲條件下提取30～40分鐘，然后冷卻靜置，離心分離，取上清液a；

(3)將步驟(2)得到的上清液a旋轉蒸發濃縮至體積為原體積的10%～15%，加入體積分數95%的乙醇溶液使乙醇的終體積濃度為80%，靜置10～20小時，離心分離，所得沉淀冷凍干燥，得粗多糖a；

(4)將步驟(3)得到的粗多糖a加水配制成質量濃度5～10mg/ml的溶液，離心分離后，取上清液b過0.45μm微孔濾膜，得濾液b；

(5)將步驟(4)得到的濾液b加入裝填有弱堿性陰離子交換樹脂的徑向流色譜柱中進行脫色素脫蛋白，上樣后用蒸餾水洗脫，徑向流色譜的條件為：上樣流速/柱高為1-2ml/（min·cm），洗脫速度/柱高為8-12ml/（min·cm），洗脫至流出液不再發生苯酚-硫酸法顯色反應，表示洗脫完畢，收集所有洗脫液，濃縮、冷凍干燥得粗多糖b；

(6)將步驟(5)得到的粗多糖b加水配制成質量濃度3～10mg/ml的溶液，通過100KD的超濾膜，膜壓力控制在0～30psi，收集截留液A，濃縮、冷凍干燥得分子量100KD以上的裂片石莼多糖組分A，將濾過液A再通過30KD的超濾膜，膜壓力控制在0～30psi，收集截留液B，濃縮、冷凍干燥得分子量30KD至100KD的裂片石莼多糖組分B，將濾過液B再通過10KD的超濾膜，膜壓力控制在0～30psi，收集截留液C，濃縮、冷凍干燥得分子量10KD至30KD的裂片石莼多糖組分C，濾過液C濃縮、冷凍干燥得分子量10KD以下的裂片石莼多糖組分D；

(7)稱取步驟(6)所得的分子量10KD至30KD的裂片石莼多糖組分C加水配制成質量濃度5～10mg/ml的溶液，離心分離后，取上清液c過0.45μm微孔濾膜，得濾液c；將濾液c加入裝填有DEAE瓊脂糖凝膠的徑向流色譜柱中，上樣后用蒸餾水洗脫，徑向流色譜的條件為：上樣流速/柱高為1-2ml/（min·cm），洗脫速度/柱高為8-12ml/（min·cm），洗脫至流出液不再發生苯酚-硫酸法顯色反應，表示洗脫完畢，檢測洗脫液中多糖成分的分子量，收集分子量范圍為18～22KD的洗脫液，濃縮、冷凍干燥得到平均分子量為20KD的多糖組分，即為裂片石莼硫酸多糖。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟（5）中，所述弱堿性陰離子交換樹脂為A103S、A105或A100,。

3.如權利要求2所述的方法，其特征在于所述弱堿性陰離子交換樹脂為A103S。

4.如權利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟（1）中，所述干燥是在55～65℃溫度下烘干。

5.如權利要求1所述的方法，其特征在于所述離心分離是在10000r/min轉速下，0～10℃溫度下離心10～15分鐘。

6.如權利要求1～5之一的方法制備得到的裂片石莼硫酸多糖。

7.如權利要求6所述的裂片石莼硫酸多糖在制備抗腫瘤藥物上的應用。

8.如權利要求7所述的應用，其特征在于所述裂片石莼硫酸多糖在制備抗胃癌藥物上的應用。

9.如權利要求7所述的應用，其特征在于所述裂片石莼硫酸多糖在制備抗結腸腺癌藥物上的應用。