[發明專利]迎陽報春組培快繁方法

有效

• 申請號: 201310375171.8
• 申請日: 2013-08-26
• 公開（公告）號: CN103404444A
• 公開（公告）日: 2013-11-27
• 發明（設計）人: 余道平;李策宏;向麗;谷海燕;張國珍;李小杰
• 申請（專利權）人: 四川省自然資源科學研究院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 成都中亞專利代理有限公司 51126
• 代理人: 何淵

技術領域

本發明涉及植物組織培養技術領域，具體涉及一種迎陽報春（Primula?oreodoxa?Franch)的組培快繁方法。

背景技術

迎陽報春(Primula?oreodoxa?Franch)是報春花科(Primulaceae)報春花屬的多年生常綠草本植物。1886?年被發現，模式產地在我國四川峨眉山，分布于四川西北部(馬邊、峨眉、天全、寶興、灌縣)?等地，為四川特有種。自然條件下4～5月份開花，花葶高5-14厘米，直立，被長粗毛；傘形花序有3-10朵小花，花朵從上而下陸續開放，紫紅色，十分艷麗，具有較高的觀賞價值，可作盆栽、地被、花壇用花。由于在自然界條件下，該花所結種子粒細小而癟，種子繁殖率低，生長周期長，且出苗不整齊，限制了該花的大面積種植，不能滿足生產需求。組織培養是快速繁殖優良植物品種的一條重要途徑，同屬的鄂報春、灰巖皺葉報春、高穗花報春、小報春、滇北球花報春已有過組培方面的報道，而迎陽報春的組織培養在國內外均沒有相關研究與報道，因此有必要開展迎陽報春的組織培養研究，并建立一套專門的快繁技術體系。

發明內容

鑒于上述不足之處，本發明的目的在于提供一種迎陽報春的組培快繁方法，提高迎陽報春的繁殖系數、縮短生長周期，能在較短時間內獲得優質苗，為迎陽報春的種質保存、應用推廣提供技術保障。

為了達到上述目的，本發明采用了以下技術方案：

（1）對外植體的選擇：

在現有對報春花的組培技術中，大部分采用腋芽、莖尖、花藥和種子作為外植體，對原植株有較大的破壞作用，不僅會影響原植株的生長和發育，而且取材數量有限。

本發明所采用的外植體為葉片，采用葉片作為外植體對原植株不會造成破壞，且數量多。經過申請人的大量反復研究實驗，得出采用葉片中下部（結合圖1和圖2所示）作為外植體對迎陽報春組培快繁效果最好，最早誘導出不定芽，且每個外植體平均能誘導出15-20個不定芽，顯著高于葉片其他部位，其不定芽誘導率100%，平均根條數，苗高，移栽成活率均高于其他外植體。本發明采用的是2012年4月初采自四川峨眉山大乘寺附近（海拔2300米）迎陽報春植株的葉片，組培時將葉片中下部切割成長0.5厘米，寬0.5厘米的切片，葉背向下接種在誘導培養基上。

（2）再生途徑的考量：

通過對現有技術中再生途徑的研究發現：現有技術均是通過愈傷組織間接發生途徑而獲得再生植株，該再生植株易發生性狀變異，成苗時間均較長，同時因為需要篩選愈傷組織誘導、增殖和分化的最佳培養基配方，同時也增加了試驗成本。在此基礎上，本發明在葉片上（特別是葉柄與葉片結合部位）直接誘導出不定芽，不需通過誘導愈傷組織、愈傷組織增殖、分化途徑來獲得大量再生植株。通過不定芽發生途徑，不僅能穩定遺傳性狀，不會發生性狀變異，還能縮短成苗周期，在2月內就能形成完整植株，只需4-5個月就可獲得大批量的再生植株。

（3）植物激素配比選擇：

通過對現有技術的對比，本申請人通過大量的創造性勞動，得出了如下結論：

本發明采用濃度較高的激素6-BA、NAA，在不定芽誘導階段采用的6-BA為3.0?mg/L，NAA為0.5mg/L，而現有技術6-BA的濃度均在2.0?mg/L以下，NAA濃度在0.2?mg/L以下，在本試驗中也使用過6-BA?1.0、2.0mg/L與NAA?0.1、0.2mg/L的配比，但是不定芽誘導效果沒有在6-BA3.0?mg/L+NAA0.5mg/L的配比下好；生根培養基使用不添加任何激素的基本培養MS，生根率100%，且組培苗的生長勢好。

（4）培養條件的篩選：

本發明的培養溫度均為(20±2)?℃，光照時間12?h/d,?光照強度為2500-3000?Lux。當溫度高于25℃，誘導不定芽的時間會延長，且芽苗、組培苗生長緩慢，葉片也會變黃，光照時間少于12小時,以及光照強度低于2500?Lux，組培苗表現為失綠、細弱現象，很難恢復成健壯苗。

本發明的具體技術方案為：

一種迎陽報春的組培快繁方法包括以下步驟：