[發明專利]中國人群CYP21A2基因篩查用試劑盒

有效

• 申請號: 201310374192.8
• 申請日: 2013-08-23
• 公開（公告）號: CN103421908A
• 公開（公告）日: 2013-12-04
• 發明（設計）人: 陳瑛;劉英華
• 申請（專利權）人: 蘇州市立醫院
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 蘇州華博知識產權代理有限公司 32232
• 代理人: 傅靖

1.中國人群CYP21A2基因篩查用試劑盒，其特征在于，該試劑盒包括以下內容：

(1)反應試劑，包括dNTP、10×PCR緩沖液、25mM?Mg²⁺離子、FastStart?Taq酶、SNaPshot?Multiplex混合液、SAP酶、Exon?I酶及其配套的緩沖液的純化試劑、純合、雜合突變的陽性對照DNA樣本、陰性對照樣本的對照DNA樣本；

(2)等比例混合的針對CYP21A2基因5個區段進行巢式PCR擴增的正向引物和反向引物混合物I和II；

(3)按一定比例混合的針對CYP21A2基因7個突變熱點的PCR延伸引物混合物III；

其中正向引物和反向引物混合物I是初級擴增引物，正向引物和反向引物混合物II是次級擴增引物；

所述試劑盒以CYP21A2基因92位點的C→T突變，955位點的C→T突變，IVS2-13位點的A／C→G突變，1069位點的C→T突變，844位點的G→T突變，518位點的T→A突變和Exon3的332-339位點缺失8個堿基共7個位點為檢測對象，針對每個位點的突變類型分別設計出擴增引物和延伸引物，針對各個目的區段同時進行巢式PCR擴增和標記延伸，通過毛細管電泳分析，一次獲得7個位點的基因型；

所述CYP21A2基因92位點的初級擴增引物序列、IVS2-13位點的初級擴增引物序列、518位點的初級擴增引物序列和Exon3332-339缺失8個堿基位點的初級擴增引物序列一致，即PF-F1：5'-TCGGTGGGAGGGTACCTGAA-3’和PF-R1：5'-TCAGCTGCATCTCCACGATGTGA-3’；

所述CYP21A2基因844位點的初級擴增引物序列、955位點的初級擴增引物序列和1069位點的初級擴增引物序列一致，即PF-F2：5’-CCTGTCCTTGGGAGACTACT-3’和PF-R2：5’-TCTCGCACCCCAGTATGACT-3’；

所述CYP21A2基因92位點的次級擴增引物序列是PS-F1：5’-TACCTGAAGGTGGGGTCAA-3’和PS-R1：5’-AAGGTGGCTCACACTTGAGG-3’；

所述CYP21A2基因IVS2-13位點的次級擴增引物序列、518位點的次級擴增引物序列和Exon3332-339缺失8個堿基位點的次級擴增引物序列一致，即PS-F2：5’-TATCTGGTGGGGAGAAAGCA-3’和PS-R2：5’-CAGGAAGCATGAGAATGCAG-3’；

所述CYP21A2基因844位點的次級擴增引物序列、955位點的次級擴增引物序列和1069位點的次級擴增引物序列一致，即PS-F3：5’-GGCCATAGAGAAGAGGGATC-3’和PS-R3：5’-AAGGCTAAGGGCACAACG-3’。

2.根據權利要求1所述的中國人群CYP21A2基因突變熱點的篩查試劑盒，其特征在于，所述針對7個CYP21A2基因位點的PCR延伸引物的終濃度分別為：CYP21A2基因92位點、Exon3332-339del位點、IVS2-13位點、518位點、844位點、955位點和1069位點分別為0.125μM、0.25μM、0.25μM、0.375μM、0.125μM、0.25μM和0.375μM。