[發明專利]用于檢測六價鉬離子的酶聯免疫試劑盒及其組建和檢測方法

有效

• 申請號: 201310373273.6
• 申請日: 2013-08-25
• 公開（公告）號: CN103412127A
• 公開（公告）日: 2013-11-27
• 發明（設計）人: 張海棠;王自良;姜金慶;范國英;黃華國
• 申請（專利權）人: 河南科技學院
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/531
• 代理公司: 鄭州市華翔專利代理事務所(普通合伙) 41122
• 代理人: 張愛軍

技術領域

本發明涉及酶聯免疫和六價鉬離子檢測領域，特別是涉及一種用于檢測六價鉬離子的酶聯免疫試劑盒及組建和檢測方法。

背景技術

我國具有豐富的鉬礦資源，總儲量840萬噸，鉬作為一種過渡態金屬元素，其化合物呈現五種價態，其中六價鉬最為穩定，也與人類的生命活動關系最為密切，缺乏與過量均會影響生命的質量。鉬是有機體必需的微量元素之一，人體各種組織都含鉬，成人體內總量為9?mg，肝臟、腎臟含量最高。鉬元素本身沒有生物活性，只有六價鉬離子與嘌呤結合形成輔酶后才具有生物活性，其生理功能主要有維持正常的新陳代謝，提高動脈壁的彈性，減少心血管疾病，通過抗氧化作用提高機體免疫機能，并可抑制亞硝胺類致癌物質在體內的合成，具有抗癌作用；六價鉬缺乏會導致齲齒、腎結石、克山病、大骨節病、食道癌等疾病。但同時六價鉬過量能夠引起機體中毒，人體攝取量超過10～15?mg時，會導致生長發育遲緩，體重下降，甚至發生痛風樣綜合癥、關節疼痛及畸形、肺部變性等病癥。動物鉬中毒表現類似銅缺乏病，1938年Ferguson首次報道了牧草中鉬含量過高，可使放牧牛產生持續性腹瀉、被毛脫色為特征的中毒性疾病。英國的“牛腹瀉病”、新西蘭的“牛泥炭瀉”和澳大利亞“牛地方性血尿癥”和我國1981年贛南地區發生的耕?！凹t皮白毛癥”等，都是六價鉬中毒的典型事件。在自然狀態下六價鉬對生物體沒有危害，但由于鉬被廣泛應用于特種鋼、機械、石油、化工、國防、航空航天、電子、核工業等諸多領域，鉬礦大量開采，六價鉬離子以各種形式進入自然界，環境污染急劇加重，加之累積效應和生物富集作用，對環境污染和人類健康構成了嚴重威脅。因此，對環境土壤、水源、飼料、食品中六價鉬含量的檢測意義重大。

目前，檢測環境六價鉬離子主要采用理化分析方法和免疫分析方法，理化分析方法包括紫外分光光度法（UV）、電化學分析法（EC）、原子吸收光譜法（AAS）、電感耦合等離子體質譜法（ICP-MS）、電感耦合等離子體原子發射光譜法（ICP-AES）、氫化物發生-原子熒光光譜法（HG-AFS）、中子活化分析法（NAA）等。這些方法各有優缺點，紫外分光光度法操作簡單，快速，干擾小，但其靈敏度不高；電化學分析法靈敏、簡便，對操作人員技術要求高；原子吸收光譜法、電感耦合等離子體質譜法、電感耦合等離子體原子發射光譜法、氫化物發生-原子熒光光譜法具有選擇性好、測定精度高、簡單、快速等優點，但所用儀器比較昂貴，只能在實驗室進行檢測，且對操作人員技術要求較為嚴格，限制了其廣泛使用；中子活化分析法是一種以核反應為基礎的分析方法，具有微量、快速、準確和非破壞性且同時可分析多元素的優點，但所需設備一般實驗室不具備，很難得到廣泛應用。自1985年Reardan等首次通過金屬-鰲合劑人工抗原制備出重金屬銦（In）單克隆抗體（mAb）并建立免疫分析方法以來，國內外重金屬污染免疫檢測技術的研究非?；钴S，但對于六價鉬離子的免疫檢測技術目前還處于實驗室階段。

因此，建立快速、簡便、敏感、特異、經濟、篩檢量大的六價鉬離子免疫檢測技術，對于減少環境污染、提高食品質量和保障食品安全具有重要意義。

發明內容

本發明要解決的技術問題：提供一種能夠快速、簡便、敏感、特異的檢測六價鉬離子的酶聯免疫試劑盒；

還提供了該酶聯免疫試劑盒的組建方法以及檢測方法。

本發明的技術方案：

一種用于檢測六價鉬離子的間接競爭酶聯免疫試劑盒，包括盒體，盒體內設有用六價鉬離子包被抗原包被過的酶標板、抗六價鉬離子單克隆抗體抗、酶標二抗、底物顯色液、終止液、六價鉬離子標準溶液、洗液濃縮液、樣品處理液。

所述六價鉬離子包被抗原是由以下方法制備的：