[發明專利]一種地高辛單抗檢測內源性洋地黃樣因子含量的試劑盒及使用方法

有效

• 申請號: 201310370989.0
• 申請日: 2013-08-22
• 公開（公告）號: CN103439507A
• 公開（公告）日: 2013-12-11
• 發明（設計）人: 馬潔;劉小兵;張慕軍
• 申請（專利權）人: 天津市康婷生物工程有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/534
• 代理公司: 天津盛理知識產權代理有限公司 12209
• 代理人: 趙瑤瑤

技術領域

本發明屬于屬于醫療器械技術領域，尤其是一種地高辛單克隆抗體檢測內源性洋地黃樣因子含量的試劑盒及使用方法。

背景技術

孕期先兆子癇（孕期早癇）是一種病發原因復雜的綜合征，如果不及時治療，可發展為子癇，危及生命。主要癥狀有高血壓、蛋白尿，水腫，驚厥，腎功能損傷等，已成為世界上孕婦致死率最高的一種疾病，目前具體病因不明。有研究證明，胎盤產生的一種導致易感婦女母體血管內皮功能障礙的物質可能是早癇病發的其中一個原因。血壓升高是該疾病最明顯的標志，同時造成對產婦內皮，腎臟和肝臟的損害。

先兆子癇（早癇）在全球孕婦中發病率為6-8%，通常發病于妊娠二期晚期或妊娠三期，大部分在孕期32周之后發病（32周前發病被認為是早期發病），極少數孕婦會在孕期20周發病。初次懷孕的孕婦發病率最高，并且隨著妊娠次數的增加，該疾病發病率大幅度降低。早癇多發于具有高血壓史，糖尿病史，肥胖癥史，自身免疫性疾病史如狼瘡，和多胎妊娠（雙胞胎或多胞胎）的孕婦中，其發病過程因人而異，大多數病例可以在分娩前被確診。少數病例在分娩后六周才被確診，稱為“產后早癇”，確診后除了剖腹產或引產手術，沒有其他治療方式。早癇是最常見的的妊娠綜合癥，同時影響母親和胎兒，導致早產兒甚至對母嬰造成生命危險。

傳統上早癇的確診標志是孕期高血壓（兩個獨立的至少相隔六小時的測量值，收縮壓為140以上和/或舒張壓為90以上）和24小時尿液樣本中的蛋白含量高于300毫克（蛋白尿）。比基線血壓（BP）高30毫米汞柱的收縮壓或高15毫米汞柱的舒張壓，不能達到140/90的絕對標準，仍然被認為是重要發病信號，但并不能就此確診。腫脹或水腫（尤其是在手和臉）最初曾被認為是診斷早癇的一個重要標志，但目前的醫學實踐證明，只有高血壓和蛋白尿可以作為診斷標準。

雖然早癇是一種致命性疾病，但其早期發病通常無癥狀，且一般情況下，早癇的信號都不是特異性的，比如孕期驚厥，在懷孕過程中，其他原因比子癇更容易導致驚厥，因此早癇的早期診斷一直是醫學界無法攻克的一個難題。

在早癇病人的癥狀中，一種鈉鉀泵抑制因子-內源性洋地黃樣因子（endogenous?digitalis-like?factor，EDLF）水平的升高，是早癇的重要標志。這種因子能夠導致血壓升高，存在于人體和動物組織及體液中，其化學結構和生物活性與植物洋地黃中提取的類固醇強心劑相似，故名“洋地黃樣因子”，此因子能夠以與地高辛等強心劑類似的機制結合到鈉鉀泵上，并抑制其活性，但目前為止，此類因子的具體化學結構仍然未知。許多高血壓病癥均發現伴隨內源性洋地黃樣因子水平的升高，因此，該因子很可能是造成高血壓的原因。

目前，地高辛多克隆抗體Digibind在美國已被FDA批準用于二期臨床實驗治療重癥早癇，并取得良好療效。

為了實現對妊娠早癇的早期診斷，達到早期治療的目的，需要發明一種可以特異性精確測量樣品中內源性洋地黃樣因子的方法，并制成操作簡便快捷的試劑盒。這種需要長期使用的免疫學分析試劑盒，要求抗體為可“無限量”供應、高特異性、高均一性的單克隆抗體。Digibind是多克隆抗體，并且價格昂貴。

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術的不足，提供一種操作簡單方便、靈敏度高、特異性強、穩定可靠的利用地高辛單抗檢測內源性洋地黃樣因子含量的試劑盒及使用方法，本試劑盒的檢測可以達到nM即納摩爾/升，為后續治療提供有利依托。

本發明實現目的的技術方案如下：

一種地高辛單抗檢測內源性洋地黃樣因子含量的試劑盒，包括如下組份

一抗地高辛單抗、二抗兔抗鼠IgG、³H標記烏本苷、聚乙二醇4000、pH=7.4的磷酸緩沖液、³H閃爍液、pH=7.4的Tris緩沖液。

而且，還包括烏本苷。

而且，所述一抗地高辛單抗10納克/毫升、二抗兔抗鼠IgG2.3×10^-8摩爾/升，所述³H標記烏本苷濃度為10.0Ci/mmol，所述聚乙二醇4000濃度為30wt%。

而且，所述試劑盒用于檢測人體血清、胎盤組織分泌液、以及冷凍胎盤組織中的內源性洋地黃樣因子的含量。

一種地高辛單抗檢測內源性洋地黃樣因子含量的試劑盒的使用方法，步驟如下

(1)采集胎盤，切成組織塊，液氮冷凍，保存于-80℃；

(2)將冷凍胎盤組織塊切成薄片，置于勻漿器中，放入液氮罐中冷凍1分鐘；以1500rpm的速度將組織薄片勻漿5分鐘；