[發(fā)明專利]一種地高辛單抗檢測內(nèi)源性洋地黃樣因子含量的試劑盒及使用方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201310370989.0 | 申請日： | 2013-08-22 |
| 公開（公告）號： | CN103439507A | 公開（公告）日： | 2013-12-11 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 馬潔;劉小兵;張慕軍 | 申請（專利權(quán)）人： | 天津市康婷生物工程有限公司 |
| 主分類號： | G01N33/577 | 分類號： | G01N33/577;G01N33/534 |
| 代理公司： | 天津盛理知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 12209 | 代理人： | 趙瑤瑤 |
| 地址： | 300200 天津市西青區(qū)經(jīng)濟(jì)*** | 國省代碼： | 天津;12 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 地高辛 檢測 內(nèi)源 洋地黃 因子 含量 試劑盒 使用方法 | ||
1.一種地高辛單克隆抗體檢測內(nèi)源性洋地黃樣因子含量的試劑盒，其特征在于：包括如下組份
一抗地高辛單克隆抗體、二抗兔抗鼠IgG、3H標(biāo)記烏本苷、聚乙二醇4000、pH=7.4的磷酸緩沖液、3H閃爍液、pH=7.4的Tris緩沖液。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的地高辛單克隆抗體檢測內(nèi)源性洋地黃樣因子含量的試劑盒，其特征在于：還包括烏本苷。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的地高辛單克隆抗體檢測內(nèi)源性洋地黃樣因子含量的試劑盒，其特征在于：所述一抗地高辛單抗10納克/毫升、二抗兔抗鼠IgG2.3×10-8摩爾/升，所述3H標(biāo)記烏本苷濃度為10.0Ci/mmol，所述聚乙二醇4000濃度為30wt%。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的地高辛單抗檢測內(nèi)源性洋地黃樣因子含量的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒用于檢測人體血清、胎盤組織分泌液、以及冷凍胎盤組織中的內(nèi)源性洋地黃樣因子的含量。
5.一種如權(quán)利要求1所述的地高辛單抗檢測內(nèi)源性洋地黃樣因子含量的試劑盒的使用方法，其特征在于：步驟如下
(1)采集胎盤，切碎，液氮冷凍，保存于-80℃；
(2)將冷凍胎盤組織塊切成薄片，置于勻漿器中，放入液氮罐中冷凍1分鐘；以1500rpm的速度將組織薄片勻漿5分鐘；
(3)收集勻漿組織，加入等量的甲醇，混勻，離心去除蛋白；收集離心上清液，真空濃縮，4℃保存；
(4)取出試劑盒中地高辛單克隆抗體、二抗兔抗鼠IgG、3H標(biāo)記烏本苷、pH=7.4的三羥甲基氨基甲烷緩沖液，分別等量加入，與等量待測樣品充分混合，室溫孵育；
(5)再加入等量的PEG4000溶液，離心，得到沉淀物；
(6)沉淀物用500微升pH7.4的PBS重懸，加入3H閃爍液；
(7)測量樣品放射量，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出樣品中所含內(nèi)源性洋地黃樣因子的濃度。
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