[發(fā)明專利]一種替度魯肽的制備方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310369843.4
• 申請(qǐng)日: 2013-08-22
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN104418949A
• 公開(kāi)（公告）日: 2015-03-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張文治;潘俊鋒;馬亞平;袁建成
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 深圳翰宇藥業(yè)股份有限公司
• 主分類號(hào): C07K14/605
• 分類號(hào): C07K14/605;C07K1/06;C07K1/04;C07K1/20
• 代理公司: 深圳市深佳知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 44285
• 代理人: 唐華明

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于藥物化學(xué)領(lǐng)域，尤其涉及一種替度魯肽的制備方法。

背景技術(shù)

短腸綜合征（short?bowel?syndrome，SBS）是指由于嚴(yán)重小腸疾病或外科手術(shù)切除大部分小腸導(dǎo)致機(jī)體無(wú)法正常吸收營(yíng)養(yǎng)而引發(fā)一系列綜合征。SBS降低了患者攝取液體和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的能力，由于殘余腸管過(guò)短，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)吸收消化障礙，可表現(xiàn)為腹瀉、脂肪瀉、體重下降，導(dǎo)致脫水和營(yíng)養(yǎng)不良，嚴(yán)重者甚至?xí)＜吧６棠c綜合征患者多不能正常飲食，有些通過(guò)積極恰當(dāng)?shù)哪c康復(fù)治療后可恢復(fù)經(jīng)口飲食，但有些則需終生依賴腸外營(yíng)養(yǎng)。而腸外營(yíng)養(yǎng)支持治療又將增加全身感染和其他長(zhǎng)期并發(fā)癥的風(fēng)險(xiǎn)。迄今為止尚無(wú)藥物可以治療短腸綜合征。

替度魯肽，英文名為telaprevir，是一種胰高血糖素樣肽2（GLP-2）類似物，一種天然生成的激素，可減少胃排空和分泌，并調(diào)節(jié)小腸內(nèi)膜細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖和修復(fù)。替度魯肽于2001年被定性為孤兒藥。臨床試驗(yàn)表明，該藥能夠降低短腸綜合征患者對(duì)胃腸外營(yíng)養(yǎng)的需求。2012年6月，歐洲藥品管理局（EMA）批準(zhǔn)替度魯肽(teduglutide)用于治療成人短腸綜合征。替度魯肽分子式為C₁₆₄H₂₅₂N₄₄O₅₅S，分子量為3752.13，氨基酸組成如下：His-Gly-Asp-Gly-Ser-Phe-Ser-Asp-Glu-Met-Asn-Thr-lle-Leu-Asp-Asn-Leu-Ala-Ala-Arg-Asp-Phe-lle-Asn-Trp-Leu-lle-Gln-Thr-Lys-lle-Thr-Asp-OH。

目前關(guān)于替度魯肽的制備，公開(kāi)號(hào)為CN101824087A的專利中采用了純固相順序偶聯(lián)的方法進(jìn)行替度魯肽的合成，具體方法為以wang樹(shù)脂為載體，采用常規(guī)順序偶聯(lián)，最終切割得到替度魯肽。而公開(kāi)號(hào)為WO2012028602A1專利中為了解決上述專利保護(hù)替度魯肽的合成方法中存在的Asp-Gly片段產(chǎn)生的降解等一系列問(wèn)題，采用片段偶聯(lián)方法進(jìn)行了替度魯肽的合成，即先合成全保護(hù)片段1-4，然后采用純化后的片段1-4與片段肽樹(shù)脂5-33進(jìn)行固相偶聯(lián)，最終裂解得到替度魯肽。

然而研究人員發(fā)現(xiàn)，不論是采用公開(kāi)號(hào)為CN101824087A的專利中的常規(guī)的逐步偶聯(lián)方法還是按照公開(kāi)號(hào)為WO2012028602A1專利進(jìn)行固相片段縮合方法制備替度魯肽都存在His1容易消旋的問(wèn)題。由于His的消旋，導(dǎo)致制得的替度魯肽難以純化，從而導(dǎo)致替度魯肽收率降低。此外，公開(kāi)號(hào)為WO2012028602A1專利采用片段1-4與片段肽樹(shù)脂5-33進(jìn)行固相偶聯(lián)的方法制備替度魯肽，仍然不能有效解決3-4位的Asp-Gly結(jié)構(gòu)所帶來(lái)的降解等副反應(yīng)，同樣會(huì)使制得的替度魯肽難以純化，進(jìn)一步導(dǎo)致替度魯肽收率降低。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明的目的在于針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，提供一種收率高的替度魯肽的制備方法，所述制備方法可以有效避免3-4位的Asp-Gly結(jié)構(gòu)所帶來(lái)的降解等副反應(yīng)，同時(shí)也可以降低His¹消旋，從而有效提高粗肽純度，提高純化收率。

為實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

一種替度魯肽的制備方法，包括：

步驟1：將Fmoc-Asp(OtBu)-OH與固相載體偶聯(lián)，得到Fmoc-Asp(OtBu)-Resin；

步驟2：Fmoc-Asp(OtBu)-Resin按照替度魯肽順序逐一偶聯(lián)Fmoc保護(hù)的替度魯肽的4-32位氨基酸得到替度魯肽4-33片段肽樹(shù)脂H-Gly-Ser(tBu)-Phe-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Ile-Leu-Asp(OtBu)-Asn(Trt)-Leu-Ala-Ala-Arg(pbf)-Asp(OtBu)-Phe-Ile-Asn(Trt)-Trp(Boc)-Leu-Ile-Gln(Tr?t)-Thr-Lys(Boc)-Ile-Thr(tBu)-Asp(OtBu)-Resin；

步驟3：固相合成替度魯肽1-3片段肽樹(shù)脂Boc-His(Trt)-Gly-Asp(OtBu)-Resin，然后裂解得到替度魯肽全保護(hù)1-3肽片段Boc-His(Trt)-Gly-Asp(OtBu)-OH；

步驟4：替度魯肽4-33片段肽樹(shù)脂在固相上偶聯(lián)替度魯肽全保護(hù)1-3肽片段，得到替度魯肽樹(shù)脂；

步驟5：替度魯肽樹(shù)脂裂解得到替度魯肽粗肽；