[發明專利]一種快速檢測魚腥草注射液綜合毒性的生物測試方法

有效

• 申請號: 201310369652.8
• 申請日: 2013-08-22
• 公開（公告）號: CN103424401A
• 公開（公告）日: 2013-12-04
• 發明（設計）人: 趙軍寧;鄢良春;鄭曉秋;朱雅寧;趙炳祥
• 申請（專利權）人: 四川省中醫藥科學院;雅安三九藥業有限公司
• 主分類號: G01N21/76
• 分類號: G01N21/76
• 代理公司: 成都高遠知識產權代理事務所(普通合伙) 51222
• 代理人: 李高峽;張娟

1.一種快速檢測魚腥草注射液綜合毒性的生物測試方法，其特征在于：包括如下步驟：

（1）制備測試用菌液：取發光細菌凍干粉，用氯離子濃度為0.1-1.0mol/L的溶液復蘇，得測試用菌液；

（2）檢測：取待檢樣品，用測試用菌液檢測，確定稀釋度-效應動力曲線以及發光強度抑制率為50%的稀釋度。

2.根據權利要求1所述的測試方法，其特征在于：步驟（1）中，所述發光細菌是費氏弧菌、明亮發光桿菌T3小種、青海弧菌及其它非致病發光細菌。

3.根據權利要求1所述的測試方法，其特征在于：步驟（1）中，所述制備測試用菌液的方法是：取型號為CS234的費氏弧菌凍干粉1支，加入0.2-1.0ml的氯離子濃度為0.51mol/L的溶液，即得測試用菌液。

4.根據權利要求1所述的測試方法，其特征在于：步驟（1）中，所述氯離子溶液的pH為5～9。

5.根據權利要求1所述的測試方法，其特征在于：步驟（2）所述檢測的方法如下：

a、預測試：取待檢樣品，用水稀釋成5個梯度的待檢液，體積百分比分別是：100%、25%、6.25%、1.5625%、0.39%，以氯離子濃度為0.1-1.0mol/L的溶液為標準液，在所述待測液和標準液中加入測試用菌液，菌液加入量為待檢液或標準液體積的1/25～1/15，放置5～30min，檢測發光強度，計算5個稀釋度的發光度抑制率；

b、確定檢測稀釋度的上限及下限：根據步驟a的結果，以抑制率為90～100%的任一稀釋度為上限，若樣品原液的抑制率未達到90%，則以樣品原液為上限；以抑制率為0～10%的任一稀釋度為下限；

c、測試：在步驟b確定的稀釋度上限和下限之間增配6～9個均勻稀釋梯度的待檢液，以氯離子濃度為0.1-1.0mol/L的溶液為標準液，在所述待測液和標準液中加入測試用菌液，菌液加入量為待檢液或標準液體積的1/25～1/15，放置5～30min，檢測發光強度，制作稀釋度-效應動力曲線，計算抑制率為50%的稀釋度。

6.根據權利要求5所述的測試方法，其特征在于：步驟a和步驟c中，所述待檢液中加有含氯離子的溶液，氯離子的濃度為0.1-1.0mol/L；所述標準液中氯離子濃度為0.51mol/L。

7.根據權利要求5所述的測試方法，其特征在于：步驟a和步驟c中，所述待檢液和氯化鈉溶液的pH為5～9。

8.根據權利要求5所述的測試方法，其特征在于：步驟a和步驟c中，所述菌液加入量為待檢液或標準液體積的1/20。

9.根據權利要求5所述的測試方法，其特征在于：步驟a和步驟c中，所述放置時間為15min。

10.根據權利要求1～9任意一項所述的測試方法，其特征在于：檢測發光強度采用型號為LUMIStox300的生物毒性測試儀或其他具有發光強度檢測功能的儀器。