[發明專利]一種快速檢測魚腥草注射液綜合毒性的生物測試方法

有效

• 申請號: 201310369652.8
• 申請日: 2013-08-22
• 公開（公告）號: CN103424401A
• 公開（公告）日: 2013-12-04
• 發明（設計）人: 趙軍寧;鄢良春;鄭曉秋;朱雅寧;趙炳祥
• 申請（專利權）人: 四川省中醫藥科學院;雅安三九藥業有限公司
• 主分類號: G01N21/76
• 分類號: G01N21/76
• 代理公司: 成都高遠知識產權代理事務所(普通合伙) 51222
• 代理人: 李高峽;張娟

技術領域

本發明涉及一種快速檢測魚腥草注射液綜合毒性的生物測試方法。?

背景技術

魚腥草注射液具有廣譜抗病毒、抗細菌作用，這種雙重抗感染作用是一般抗菌藥所不具備的，故為臨床常用的抗感染產品，被列為《全國中醫醫院急診科(室)必備中成藥》，在臨床上應用已有幾十年。但是，其不良反應存在多發、普遍、臨床表現的多樣、不可預知、不良反應種類的不確定、批與批之間不良反應存在差異性等特點。從國家藥品不良反應監測中心數據庫收到的使用魚腥草注射液等注射劑的不良反應病例報告來看，過敏反應、呼吸系統反應、心腦血管系統反應的構成比依次排在魚腥草注射液不良反應的前三位。其中過敏反應報道數量最多，約占50%以上。主要表現為皮膚和全身過敏反應，一般停藥或給予抗過敏治療即可消除。主要的嚴重不良反應表現為過敏性休克，且發生率較高為29.84%，并有死亡病例發生。?

雖然目前已經采取了諸多手段對魚腥草注射液的質量進行了控制，如：1.藥材原料質量控制（GAP）；2.輔料和內包裝材料的控制；3.生產過程質量控制關鍵點(GMP)；4.質量標準的控制（采用多成分定量測定，指紋圖譜等）；5.流通過程質量控制(GSP)；6.使用環節藥品質量控制等，但仍然無法有效的保證其藥效的一致性和降低其不良反應的發生率。因此，有必要引入新的方法輔助其質量控制。?

發明內容

為了解決上述問題，本發明提供了一種快速檢測魚腥草注射液綜合毒性的生物測試方法。?

本發明快速檢測魚腥草注射液綜合毒性的生物測試方法，包括如下步驟：?

（1）制備測試用菌液：取發光細菌凍干粉，用氯離子濃度為0.1-1.0mol/L的溶液復蘇，得測試用菌液；?

（2）檢測：取待檢樣品，用測試用菌液檢測，確定稀釋度-效應動力曲線以及發光強度抑制率為50%的稀釋度。?

稀釋度-效應動力曲線，是指待檢溶液稀釋度與發光強度抑制率的關系曲線。?

步驟（1）中，所述發光細菌是費氏弧菌、明亮發光桿菌T3小種、青海弧菌及其它非致病發光細菌。?

步驟（1）中，所述制備測試用菌液的方法是：取型號為CS234的費氏弧菌凍干粉1支，加入0.2-1.0ml的氯離子濃度為0.51mol/L的溶液，即得測試用菌液。?

步驟（1）中，所述含氯離子的溶液的pH為5～9。?

步驟（2）所述檢測的方法如下：?

a、預測試：取待檢樣品，用水稀釋成5個梯度的待檢液，體積百分比分別是：100%、25%、6.25%、1.5625%、0.39%，以氯離子濃度為0.1-1.0mol/L的溶液為標準液，在所述待測液和標準液中加入測試用菌液，菌液加入量為待檢液或標準液體積的1/25～1/15，放置5～30min，檢測發光強度，計算5個稀釋度的發光度抑制率；?

b、確定檢測稀釋度的上限及下限：根據步驟a的結果，以抑制率為90～100%的任一稀釋度為上限，若樣品原液的抑制率未達到90%，則以樣品原液為上限；以抑制率為0～10%的任一稀釋度為下限；?

c、測試：在步驟b確定的稀釋度上限和下限之間增配6～9個均勻稀釋梯度的待檢液，以氯離子濃度為0.1-1.0mol/L的溶液為標準液，在所述待測液和標準液中加入測試用菌液，菌液加入量為待檢液或標準液體積的1/25～1/15，放置5～30min，檢測發光強度，制作稀釋度-效應動力曲線，計算抑制率為50%的稀釋度。?

本發明稀釋度，是指待檢溶液被沖淡的程度。例如，1ml魚腥草注射液用3ml水稀釋，稀釋度為25%。?

如果稀釋度的值小，說明待檢魚腥草注射液的毒性大，如果稀釋度的值大，說明待檢魚腥草注射液的毒性小。?

抑制率為50%的稀釋度，即本發明EC₅₀。?

步驟a和步驟c中，所述待檢液中加有含氯離子的溶液，其氯離子濃度為0.1-1.0mol/L；所述標準液中氯離子濃度為0.51mol/L。?

步驟a和步驟c中，所述待檢液和氯化鈉溶液的pH為5～9。?

步驟a和步驟c中，所述菌液加入量為待檢液或標準液體積的1/20。?

步驟a和步驟c中，所述放置時間為15min。?

前述檢測方法中，發光強度采用型號為LUMIStox300的生物毒性測試儀或其他具有發光強度檢測功能的儀器。?