[發明專利]ELISA檢測融合蛋白rMBP?NAP的方法有效
| 申請號： | 201310368917.2 | 申請日： | 2013-08-22 |
| 公開（公告）號： | CN103558386B | 公開（公告）日： | 2017-03-01 |
| 發明（設計）人： | 康巧珍;汲振余;劉鑫;李國棟;王婷;陳嬌;傅國 | 申請（專利權）人： | 鄭州大學 |
| 主分類號： | G01N33/577 | 分類號： | G01N33/577;G01N33/531;G01N21/31 |
| 代理公司： | 北京科億知識產權代理事務所(普通合伙)11350 | 代理人： | 湯東鳳 |
| 地址： | 450001 河南省鄭州市高新*** | 國省代碼： | 河南;41 |
| 權利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | elisa 檢測 融合 蛋白 rmbp nap 方法 | ||
1.ELISA檢測融合蛋白rMBP-NAP的方法，包括以下步驟：
1）包被：將100ul被包被緩沖液稀釋至500ng/mL的兔抗幽門螺桿菌NAP多抗，包被至固體載體，用洗滌緩沖液洗滌??
2）封閉：再加封閉液以封閉，孵育后洗滌
3）加樣：分別加入100ul工作濃度的rMBP-NAP抗原標準品和待測樣品，孵育后洗滌
4）分別加入稀釋至50ng/mL的小鼠MBP單抗100ul，孵育后洗滌
5）分別加入稀釋至1mg/mL的、辣根過氧化物酶HRP標記的羊抗小鼠IgG抗體100ul，孵育后洗滌
6）加入底物顯色，并于450nm波長處測定吸光值OD。
2.如權利要求1所述的方法，其特征在于：
所述兔抗幽門螺桿菌NAP多抗的制備方法為：以rMBP-NAP免疫兔得到多抗血清，再經以NAP-GST融合蛋白為配體的親和層析純化制得。
3.如權利要求2所述的方法，其特征在于，所述親和層析包括：上樣前，用磷酸鹽濃度10mM、pH為7.4的PBS緩沖液平衡層析柱，該緩沖液中NaCl濃度為137mM。
4.如權利要求2所述的方法，其特征在于，所述親和層析包括：在洗脫前，用磷酸鹽濃度10mM、pH為7.4的PBS緩沖液洗滌，該緩沖液中NaCl濃度為500mM。
5.如權利要求2所述的方法，其特征在于，所述親和層析包括:使用0.1?mol/L、pH2.5的甘氨酸-HCl緩沖液將兔抗幽門螺桿菌NAP多抗洗脫。
6.如權利要求1所述的方法，其特征在于：所述封閉液為磷酸鹽濃度為0.15?mol/L、吐溫20的體積分數為0.05%、pH?7.4?的PBST緩沖液，其中還含有質量體積分數為2-5%的牛血清白蛋白。
7.如權利要求1所述的方法，其特征在于：所述包被緩沖液為0.05mol/L?、pH9.6的碳酸鹽緩沖液。
8.如權利要求1所述的方法，其特征在于：所述步驟1-5的洗滌條件獨立地選自：使用0.15?mol/L、pH?7.4?PBST緩沖液進行洗滌。
9.如權利要求1所述的方法，其特征在于：所述步驟4或5所用稀釋液為磷酸鹽濃度為0.15?mol/L、吐溫20的質量分數為0.05%、pH?7.4?的PBST緩沖液。
10.如權利要求1所述的方法，其特征在于：所述步驟2、3、4或5中孵育的條件為：37?℃孵育1h。
該專利技術資料僅供研究查看技術是否侵權等信息，商用須獲得專利權人授權。該專利全部權利屬于鄭州大學，未經鄭州大學許可，擅自商用是侵權行為。如果您想購買此專利、獲得商業授權和技術合作，請聯系【客服】
本文鏈接：http://www.szxzyx.cn/pat/books/201310368917.2/1.html，轉載請聲明來源鉆瓜專利網。
- 上一篇：一種羊肚菌精華物質的提取方法
- 下一篇：一種黑豆牛肉醬
