[發(fā)明專利]檢測齲齒蛋白的質譜模型及構建方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310368422.X
• 申請日: 2013-08-22
• 公開（公告）號: CN103483442A
• 公開（公告）日: 2014-01-01
• 發(fā)明（設計）人: 張學記;馬慶偉;李燕;劉曉霏;林燕
• 申請（專利權）人: 向華
• 主分類號: C07K14/47
• 分類號: C07K14/47;G01N30/72
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發(fā)明涉及齲齒檢測領域，為一種全新的非入侵性檢測方法，在體外對齲齒進行早期的發(fā)現(xiàn)和檢測。?

背景技術

蛀牙，有時也有人叫它蟲牙，學名齲齒。其主要形成原因是牙菌斑。牙菌斑是牙齒表面的一層幾乎無色的薄膜，含有造成齲齒的細菌。每次進食后，牙菌斑中的這些細菌會和食物中的糖分或淀粉發(fā)生化學作用，產生腐蝕牙齒的酸性物質。久而久之，牙齒的琺瑯質便會破壞，形成比較脆弱的小蛀斑，若繼續(xù)惡化則會形成牙洞，即蛀牙。所以，蛀牙是從小蛀斑發(fā)展而來的，不是真的有蛀蟲或什么其他蟲子，而是牙齒被逐漸腐蝕的結果。蛀牙在嚴重情況下，會導致牙齒的壞死和脫落。?

蛀牙是非常嚴重的問題。如果置之不理，蛀牙能破壞牙齒并破壞牙齒的中央神經，從而導致膿腫，也就是牙根頂端的局部感染。一旦膿腫形成，只能通過牙根管療法、外科手術或拔除牙齒進行治療。“牙疼不是病，疼起來真要命”一直是廣為流傳的一句俗語，但其實并不科學，因為牙疼是一種口腔疾病的癥狀，尤其是在得了蛀牙的情況下，那真是吃不下，睡不著，自己難受，家人也很心疼。千萬不能有等一等，算了吧的觀念。“牙疼不是病”的觀點不僅是錯誤的，而且會耽誤治療，造成蛀牙惡化，牙齒壞死，而且還有可能導致更多蛀牙的產生。真要是到了疼得實在受不了的階段，有時就連牙醫(yī)也幫不上忙，那真是小洞不補，大洞吃苦。?

目前蛀牙或齲齒的檢測仍然停留在臨床表征檢測水平，缺乏早期預警的技術手段。近年來也出現(xiàn)了一些新型檢測技術，如：中國專利申請2007800288750、“唾液分析”公開了一種利用核磁共振譜技術鑒定口腔生物代謝物的方法，包括：收集個體唾液樣本，從中獲得個體數(shù)字化核磁共振光譜，將個體光譜與電腦中的參考模型進行比對，以間接測定口腔健康，其中光譜測定峰為甲醇、膽堿、亮氨酸等有機或無機物。由于該方法針對口腔健康相關的代謝物（如甲醇、膽堿、亮氨酸等有機或無機物），盡管其在一定程度上能表征該口腔健康的特征圖譜，但由于所述代謝物與口腔健康并不存在唯一對應性，且所述口腔健康范圍缺乏確定的標準，因此其得到的圖譜實質上是上述各種分子的圖譜集合，因此既需要處理和比對的圖譜信息量過大，并且因待檢分子過于龐大而導致其圖譜特征性（即口腔健康特征性）偏低，只適用于基礎研究而無法推廣到實際應用中。?

基質輔助激光解析電離飛行時間質譜(MALDI-TOF-MS)是近年來發(fā)展起來的一種新型?的軟電離生物質譜，其原理是用激光照射樣品與基質形成的共結晶薄膜，基質從激光中吸收能量傳遞給生物分子，而電離過程中將質子轉移到生物分子或從生物分子得到質子，而使生物分子電離的過程。TOF的原理是離子在電場作用下加速飛過飛行管道，根據(jù)到達檢測器的飛行時間不同而被檢測即測定離子的質荷比（M/Z）與離子的飛行時間成正比，檢測離子。盡管MALDI-TOF的準確度高達0.1%～0.01%，遠遠高于目前常規(guī)應用的SDS電泳與高效凝膠色譜技術，但在疾病標志物尤其是齲齒的應用中仍然存在一些缺陷。作為最接近的現(xiàn)有技術，王國云等人報道蛋白質組學在口腔醫(yī)學中的研究進展（中華口腔醫(yī)學雜志，2006年05期），其中比較了口腔正常牙體組織和唾液蛋白質組學，并分析了口腔病原菌的可能的特征蛋白。然而，該報道僅僅公開了可以使用包括基質輔助激光解析電離飛行時間質譜在內的質譜分析法對口腔疾病進行研究，但并未公開任何具體的口腔疾病特征蛋白或標記物，因此國內迄今為止尚無采用MALDI-TOF-MS技術獲得檢測齲齒標志物或齲齒唾液特征蛋白的報道。?

因此目前需要新的齲齒的鑒定和分析方法（如質譜法）來實現(xiàn)快速、準確、廉價、便捷的分類結果。?

發(fā)明內容

本發(fā)明目的是為了建立一種對齲齒易感性標志物或齲齒唾液特征蛋白的檢測技術，提出一種用于檢測齲齒唾液特征蛋白的質譜模型及其制備方法。?

本發(fā)明的第一個目的是提供一種用于檢測齲齒特征蛋白的唾液特征蛋白組合，由表征質荷比為3324.8m/z、3186.2m/z、3195.8m/z的齲齒特征蛋白組成，其中氨基酸序列分別如SEQ?ID?No.1、SEQ?IDNo.2、SEQ?ID?No.3所示：?

SEQ?ID?No.1：Lys-Met-Thr-Glu-Ala-Gln-Glu-Asp-Gly-Gln-Ser-Thr-Ser-Glu-Leu-Ile-Gly-Gln-Phe-Gly-Val-Gly-Phe-Tyr-Ser-Ala-Phe-Leu-Val-Ala-Asp-Lys-Val；?