[發(fā)明專利]一種銀杏內(nèi)酯C的分離純化方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310368286.4
• 申請日: 2013-08-21
• 公開（公告）號: CN103396421A
• 公開（公告）日: 2013-11-20
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 肖志勇;于垂亮;周力軍;呂署一;蔣俊
• 申請（專利權(quán)）人: 上海信誼百路達藥業(yè)有限公司
• 主分類號: C07D493/20
• 分類號: C07D493/20
• 代理公司: 上海新天專利代理有限公司 31213
• 代理人: 王巍

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及中藥制備，具體涉及銀杏內(nèi)酯C的分離純化方法。

背景技術(shù)

銀杏葉內(nèi)含多種活性成分，主要有黃酮、萜內(nèi)酯，此外還有有機酸、烷基酚和烷基酚酸、甾體化合物、微量元素等。目前，已知銀杏葉中的藥用成分主要是銀杏黃酮類和銀杏內(nèi)酯類物質(zhì)。中國自古以來就有銀杏葉入藥和食療的記載，其中《本草品匯精要》提到銀杏葉能“歸肺經(jīng)，斂肺平喘，益心止痛”。現(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)銀杏內(nèi)酯具有獨特的生理作用和治療價值，銀杏內(nèi)酯類為強血小板活化因子(PAF)拮抗劑。

血小板活化因子是一種哺乳動物內(nèi)源性生理活性物質(zhì)，主要是與過敏、潰瘍、哮喘、血栓形成，某些炎癥、臟器移植的異體排斥，冠心病人由于缺氧引起的心肌損傷等的發(fā)病密切相關(guān)，因此，血小板活化因子拮抗劑有可能用于上述疾病的防治。另外，銀杏提取物對中樞神經(jīng)賦活和早老性癡呆的防治具有特殊意義。由于銀杏內(nèi)酯具有獨特的藥理作用，而且這些成分目前僅發(fā)現(xiàn)存在于銀杏一種植物中，該成分結(jié)構(gòu)復(fù)雜，人工合成難度極大，因此，通過銀杏葉的提取得到已成為銀杏內(nèi)酯的主要來源。有關(guān)銀杏內(nèi)酯提取分離方法的報道很多，但普遍存在工藝復(fù)雜，費時費力，銀杏內(nèi)酯收率不高，純度不高。中國發(fā)明專利《從銀杏葉中提取分離銀杏內(nèi)酯C的方法》（專利申請?zhí)?00710050239.X）中采用硅膠柱層析分離銀杏內(nèi)酯C,此方法的缺點在于硅膠不能回收再利用，要使用大量有機溶劑洗脫，不利于工業(yè)化生產(chǎn)，因此，有待于進一步改進銀杏內(nèi)酯提取分離方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于克服上述不足之處，研究設(shè)計提供一種操作簡便，產(chǎn)品得率高，純度高的銀杏內(nèi)酯C的分離純化方法。

本發(fā)明提供了一種銀杏內(nèi)酯C的分離純化方法。

該方法包括下列步驟：

（1）銀杏葉提取物用有機溶劑萃取得到萃取物；

（2）萃取物通過MCI-GEL?CHP系列吸附樹脂，先用0-20%的乙醇洗脫1-4BV除雜，再用20%-40%乙醇洗脫樹脂1-6BV，收集含銀杏內(nèi)酯C的洗脫液；

（3）洗脫液減壓蒸干得銀杏內(nèi)酯C粗品，回收溶劑，加入1/2-2倍粗品量的10%-90%乙醇，40℃-70℃加熱使粗品全部溶解后，過濾，濾液于2℃-10℃冷藏放置12-48h，析出結(jié)晶，反復(fù)結(jié)晶1-3次，用純化水洗結(jié)晶1-5次，于60℃-120℃真空加熱烘干，即得銀杏內(nèi)酯C。

本發(fā)明的銀杏內(nèi)酯C的分離純化方法，所述步驟（1）銀杏葉提取物（EGB）為市售，或者自制。

所述自制銀杏葉提取物（EGB）操作如下：以銀杏干葉為原料，粉碎，用40%-80%乙醇水溶液提取，提取溶劑用量為藥材重量的4-8倍V/W，提取次數(shù)為3-4次，每次提取時間為1-2小時，合并提取液，減壓濃縮回收乙醇至無乙醇味后，過濾，濾液上大孔吸附樹脂D101或HP20柱,柱體積為藥材量的1-1.5倍量（V/W）,水洗2-3BV去雜，60%-80%乙醇洗脫至洗脫液顏色變淡為止，減壓濃縮洗脫液即得銀杏葉提取物。

所述步驟（1）有機溶劑選自乙酸乙酯、乙酸甲酯、乙酸丙酯、乙酸丁酯、丙酮、甲基乙基酮、正丁醇或異丁醇中的一種或兩種混合溶劑萃取，優(yōu)選乙酸乙酯和丙酮，萃取次數(shù)為1-6次，優(yōu)選3次，每次萃取所用溶劑用量為銀杏葉提取物（EGB）5-15倍量（V/W），優(yōu)選10倍量（V/W）。

步驟（2）所用吸附樹脂填料為MCI-GEL?CHP系列反相吸附樹脂，其技術(shù)參數(shù)為：粒徑為75-150μm，平均粒徑為120μm，PH范圍為0-14，孔徑為450埃，基體為聚苯乙烯和二乙烯基共聚物。

所述MCI-GEL?CHP系列反相吸附樹脂為三菱化學(xué)株式會社生產(chǎn)，型號為CHP20/P120。

除雜溶劑為0%-20%乙醇溶液，優(yōu)選10%乙醇溶液，洗脫體積為1-4BV，優(yōu)選1-2BV。

所述BV為本領(lǐng)域公認的洗脫柱體積單位。

洗脫溶劑為20%-40%乙醇，優(yōu)選30%乙醇，洗脫體積為1-6BV，優(yōu)選2-3BV。

所述步驟（3）結(jié)晶溶劑為10%-90%乙醇，優(yōu)選20%-50%乙醇。

其中重結(jié)晶步驟為反復(fù)重結(jié)晶1-3次，優(yōu)選2次。

洗結(jié)晶步驟為用純化水洗結(jié)晶1-5次，優(yōu)選3次。

所述步驟（3）結(jié)晶：將MCI-GEL柱層析所得含銀杏內(nèi)酯C流份于65℃以內(nèi)和-0.09--0.1MPa條件下減壓旋蒸干至無溶劑，40℃-70℃加熱溶解于10%-90%乙醇中，趁熱過濾，濾液于2℃-10℃條件下放置12-48小時，析出結(jié)晶，過濾即得銀杏內(nèi)酯C。