[發明專利]改良的黃燈籠辣椒葉片基因組DNA提取方法有效
| 申請號： | 201310366833.5 | 申請日： | 2013-08-21 |
| 公開（公告）號： | CN103898090A | 公開（公告）日： | 2014-07-02 |
| 發明（設計）人： | 劉子記;朱婕;曹振木;楊衍;牛玉;詹園鳳 | 申請（專利權）人： | 中國熱帶農業科學院熱帶作物品種資源研究所 |
| 主分類號： | C12N15/10 | 分類號： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 57173*** | 國省代碼： | 海南;66 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 改良 燈籠 辣椒 葉片 基因組 dna 提取 方法 | ||
【權利要求書】：
1.一種改良的黃燈籠辣椒葉片基因組DNA提取方法，其特征在于，包括以下步驟：
(1)配制CTAB-3提取液，高溫滅菌后，65℃預熱；CTAB-3提取液為：0.1mol?L-1Tris?pH7.5，0.05mol?L-1EDTA?pH8.0，0.7mol?L-1NaCl，2％CTAB，0.5％PVP，0.2％DDT；其中，百分比為質量百分比濃度；
(2)利用液氮將幼嫩的黃燈籠辣椒葉片研磨成粉末裝入2.0mL離心管中，樣品達到1/4處為宜，每管加入預熱的CTAB-3提取液700μL置于65℃恒溫水浴箱中60min每隔10min輕輕搖動一次；
(3)加入苯酚、氯仿、異戊醇混合液700μL充分混勻15min，動作緩慢，4℃12000rpm離心6min；苯酚/氯仿/異戊醇體積比為25∶24∶1；
(4)吸取上清液轉入1.5mL離心管中，加入等體積的氯仿、異戊醇混合液充分混勻15min，動作緩慢，4℃12000rpm離心6min；氯仿、異戊醇體積比為24∶1；
(5)吸取上清液轉入1.5mL離心管中，加入2倍體積預冷的無水乙醇，輕輕混勻，置-20℃冰箱30min沉淀；
(6)用滅菌牙簽挑出DNA絮狀沉淀，置1.5mL離心管中，采用70％乙醇漂洗兩遍，然后晾干；
(7)加入100μL滅菌超純水，4℃冰箱溶解。
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