[發明專利]微型觀賞紅葉石楠葉片離體培養方法

有效

• 申請號: 201310365560.2
• 申請日: 2013-08-21
• 公開（公告）號: CN103392607A
• 公開（公告）日: 2013-11-20
• 發明（設計）人: 蔣澤平;董筱昀;呂運舟
• 申請（專利權）人: 江蘇省林業科學研究院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及植物培養組織進行快速繁殖的方法，具體為微型觀賞紅葉石楠葉片為外植體的組織培養方法。

背景技術

微型觀賞紅葉石楠(Photinia?lochengensis?Yü)為常綠灌木或小喬木，是紅葉石楠中一個矮生、小葉的優良變異品種。它具備的優勢：1)耐寒性好，耐最低溫度-20℃，能在北京以南地區正常生長，較其它紅葉石楠品種耐寒性更好；2)在春季直到5月中下旬，嫩枝、新葉均呈鮮紅亮麗色，9月下旬秋葉萌發再次呈鮮紅色，與其他紅葉石楠品種比，紅葉期更長，色澤鮮亮，枝葉密集而細小，萌芽能力強，其株型較矮小，分枝力強，觀賞效果較好；3)生長速度適中，但較其他品種慢，能廣泛用于色塊和綠蘺，枝干細嫩，株型緊湊，可以減少修剪次數降低用工成本。國內外學者已經開展了扦插、以芽為外植體的組培快繁研究。在現有繁殖技術中，組織培養的方法已有報道，但報道中研究采用當年生嫩枝的芽為外植體的芽生芽方式進行組培繁殖，使用外植體多，增殖周期較長，增殖系數偏低，繁殖的效率不高等問題。

發明內容

為了克服現有技術的不足，本發明目的在于提供一種適合微型觀賞紅葉石楠葉片為外植體的組織培養方法，可以節省外植體的使用量，同時進行愈傷組織誘導分化方式培養，產生的不定芽更多，繁殖系數更高，可以大大提高離體培養的效率。

本發明是通過以下技術方案來實現的：

微型觀賞紅葉石楠葉片離體培養方法，按下列步驟進行：

(1)準備基本培養基，有2種。

一種是誘導愈傷組織形成的培養基，每升基本培養基中含有：硝酸鉀1520-1900mg，硝酸銨1320-1650mg，磷酸二氫鉀136-170mg，硫酸鎂296-370mg，二水氯化鈣440mg，碘化鉀0.83mg，硼酸6.2mg，四水硫酸錳22.3mg，七水硫酸鋅8.6mg，二水鉬酸鈉0.25mg，五水硫酸銅0.025mg，氯化鈷0.025mg，七水硫酸亞鐵27.8mg，乙二胺四乙酸鈉37.3mg，維生素B10.1mg，維生素B60.5mg，VB50.5mg，甘氨酸2.0mg，肌醇100mg，蔗糖30000mg，卡拉膠6500mg。

另一種是除了誘導愈傷組織形成培養外的分化增殖培養、壯苗培養、生根培養的培養基，每升基本培養基中含有：四水硝酸鈣371-556mg，硝酸銨268-400mg，硫酸鉀600-990mg，七水硫酸鎂248-370mg，磷酸二氫鉀115-170mg，二水氯化鈣72-96mg，四水硫酸錳22.4mg，七水硫酸鋅8.6mg，硼酸6.2mg，五水硫酸銅0.25mg，二水鉬酸鈉0.25mg，七水硫酸亞鐵34.1mg，乙二胺四乙酸鈉46.6mg，維生素B₁1.0mg，維生素B₆0.5mg，VB₅0.5mg，甘氨酸2.0mg，肌醇100mg，蔗糖20000mg，卡拉膠6500mg。

(2)外植體的接種

采用經選育的微型觀賞紅葉石楠當年生嫩葉為外植體，經70％酒精消毒20秒，再用0.1％的升汞溶液消毒8-10分鐘，用無菌水沖洗3-5次，作為外植體進行培養；

(3)愈傷組織誘導培養

在超凈的工作臺上，無菌條件下，將外植體接種在經消毒的含有誘導愈傷組織形成的培養基的三角瓶中，先將其置于黑暗條件下10-15天后，再置于普通日光燈為光源、光照強度為1500-20001x下，每日光照15小時，溫度20-25℃、濕度為50％-60％，培養48天，形成愈傷組織，

所述的誘導愈傷產生的培養基由以下重量含量的原料組成：

每升基本培養基含：

玉米素(ZT)0.5-1.0毫克；

6-芐基嘌呤(BA)0.5-1.0毫克；

α-萘乙酸(NAA)0.1-0.2毫克；

2，4-二氯苯氧乙酸(2，4-D)0.5-1.0毫克；

(4)分化增殖培養

將上述(3)步中形成的愈傷組織，剪切，轉接于經消毒的含有分化增殖培養基的三角瓶中，進行增殖培養，不斷增殖，視繁殖生產需要達2000瓶進入下一步，

所述的分化增殖培養基為：

每升基本培養基含：

玉米素(ZT)1.0-2.0毫克；

6-芐基嘌呤1.0-2.0毫克；

α-萘乙酸(NAA)0.05-0.1毫克；

(5)壯苗培養