[發明專利]微型觀賞紅葉石楠葉片離體培養方法

有效

• 申請號: 201310365560.2
• 申請日: 2013-08-21
• 公開（公告）號: CN103392607A
• 公開（公告）日: 2013-11-20
• 發明（設計）人: 蔣澤平;董筱昀;呂運舟
• 申請（專利權）人: 江蘇省林業科學研究院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.微型觀賞紅葉石楠葉片離體培養方法，其特征是按下列步驟進行：

(1)準備基本培養基，有2種。

一種是誘導愈傷組織形成的培養基，每升基本培養基中含有：硝酸鉀1520-1900mg，硝酸銨1320-1650mg，磷酸二氫鉀136-170mg，硫酸鎂296-370mg，二水氯化鈣440mg，碘化鉀0.83mg，硼酸6.2mg，四水硫酸錳22.3mg，七水硫酸鋅8.6mg，二水鉬酸鈉0.25mg，五水硫酸銅0.025mg，氯化鈷0.025mg，七水硫酸亞鐵27.8mg，乙二胺四乙酸鈉37.3mg，維生素B10.1mg，維生素B60.5mg，VB50.5mg，甘氨酸2.0mg，肌醇100mg，蔗糖30000mg，卡拉膠6500mg。

另一種是除了誘導愈傷組織形成培養外的分化增殖培養、壯苗培養、生根培養的培養基，每升基本培養基中含有：四水硝酸鈣371-556mg，硝酸銨268-400mg，硫酸鉀600-990mg，七水硫酸鎂248-370mg，磷酸二氫鉀115-170mg，二水氯化鈣72-96mg，四水硫酸錳22.4mg，七水硫酸鋅8.6mg，硼酸6.2mg，五水硫酸銅0.25mg，二水鉬酸鈉0.25mg，七水硫酸亞鐵34.1mg，乙二胺四乙酸鈉46.6mg，維生素B₁1.0mg，維生素B₆0.5mg，VB₅0.5mg，甘氨酸2.0mg，肌醇100mg，蔗糖20000mg，卡拉膠6500mg。

(2)采用多年生微型觀賞紅葉石楠的當年生嫩葉片為外植體，經70％酒精消毒20-30秒，再用0.1％的升汞溶液滅菌8-10分鐘，用無菌水沖洗3-5次；

(3)在超凈的工作臺上，無菌條件下，將消毒的外植體接種在經消毒的含有誘導愈傷組織培養基的三角瓶中，先將其置于黑暗條件下10-15天后，再置于普通日光燈為光源、光照強度為1500-20001x下，每日光照15小時，溫度20-25℃、濕度為50％-60％，培養48天，長成愈傷組織；

所述的誘導愈傷組織培養基為：每升基本培養基含：玉米素0.5-1.0毫克、6-芐基嘌呤0.5-1.0毫克、α-萘乙酸0.1-0.2毫克、2，4-二氯苯氧乙酸0.5-1.0毫克；

(4)將從(3)步中培養的愈傷組織，剪切，轉接于經消毒的含有分化增殖培養基的三角瓶中，進行增殖培養，不斷增殖，視繁殖生產規模需要達2000左右瓶進入下一步；

所述的分化增殖培養基為：每升基本培養基含：玉米素1.0-2.0毫克、6-芐基嘌呤1.0-2.0毫克、α-萘乙酸0.05-0.1毫克；

(5)將(4)步中培養的試管芽苗，剪切，接種于經消毒的含有壯苗培養基的三角瓶中，進行壯苗培養，30天后進入下一步；

所述的壯苗培養基為：每升基本培養基含：玉米素0.5-1.0毫克、6-芐基嘌呤0.5-1.0毫克、α-萘乙酸0.1-0.2毫克；

(6)將(5)步中的試管壯苗，去掉基部愈傷組織和部分葉片，留3-4片葉片，接種于經消毒的含有生根培養的培養基的三角瓶中，進行生根培養8-10天；

所述的生根培養基為：每升基本培養基含：α-萘乙酸0.3-0.5毫克、吲哚乙酸0.4-0.8毫克和檸檬酸50-100毫克；

(7)將(6)步中生長的生根小苗，取出清洗，移栽到含有泥炭和黃心土體積比為泥炭：黃心土＝1∶1的基質中，澆透水，保持溫度28℃左右，相對濕度85％以上，前10天遮光70％，后逐漸見光，15天后生根成活，生根率達96％以上，50天左右，全光照。