[發明專利]一種三層結構的肌酸酐含量檢測試劑的制備方法

有效

• 申請號: 201310363461.0
• 申請日: 2011-09-20
• 公開（公告）號: CN103472239A
• 公開（公告）日: 2013-12-25
• 發明（設計）人: 徐維琛;朱進清;高玉蘭;程志敬
• 申請（專利權）人: 天津希恩思生化科技有限公司
• 主分類號: G01N33/70
• 分類號: G01N33/70;G01N21/64
• 代理公司: 天津盛理知識產權代理有限公司 12209
• 代理人: 趙瑤瑤

1.一種三層結構的肌酸酐含量檢測試劑的制備方法，其特征在于：

檢測試劑包括：肌酸酐酶、肌酸酶、肌氨酸氧化酶和辣根過氧化物酶，熒光染料5（6）-羧基-2,7-二氯二氫熒光素二特戊酸酯，肌酸酐在肌酸酐酶的催化下被水解成為肌酸，肌酸在肌酸酶的催化下被水解成肌氨酸，肌氨酸隨之在肌氨酸氧化酶的催化下生成甘氨酸以及少量的過氧化氫，在辣根氧化物酶的催化下，過氧化氫催化氧化了5（6）-羧基-2,7-二氯二氫熒光素二特戊酸酯并生成具有熒光響應的產物，通過監測熒光增強的速率以及標準曲線，獲得肌酸酐濃度，其中所述肌酸酐酶：肌酸酶：肌氨酸氧化酶：辣根過氧化物酶：熒光染料的重量比為：1：50：60：5；

三層結構為：

⑴染料底層：將熒光染料修飾過的纖維素和D4水凝膠混合并攪拌，在一張干凈的塑料薄膜上用刮刀涂膜機涂上一層D4水凝膠的薄膜并使之自然風干；

⑵蛋白酶固定層：在PVA-Sbq（聚丙烯醇-苯基吡啶乙烯絡合物）的水溶液中加入10%的牛血清蛋白以及反應所需的肌酸酐酶、肌酸酶、肌氨酸氧化酶和辣根過氧化物酶，攪拌25-40分鐘以上，用刮刀涂膜機涂上一層酶的PVA-Sbq溶液，將紫外燈置于膜層的上方30分鐘，使苯基吡啶乙烯交聯并使膜層變干；

⑶頂層保護層：最后在上面用刮刀涂膜機涂上一層含有10%炭黑的D6水凝膠，并使膜層自然風干；

三層結構的具體制備步驟如下：

⑴將176mg纖維素固定的5（6）-羧基-2,7-二氯二氫熒光素二特戊酸酯和2.6g的4%D4水凝膠溶液混合并攪拌均勻，使纖維素粉末在溶液中均勻分散；

⑵將步驟⑴中所制備的溶液均勻在塑料薄膜上使之形成一層厚度為100uM的薄膜并晾干；

⑶將30mg肌酸酶、35mg辣根過氧化物酶、0.63mg肌酸酐酶、2.6mg肌氨酸氧化酶、340mg水和1.33g濃度為10%并含有10%牛血清蛋白的PVA-Sbq溶液混合，并在冰上攪拌均勻；

⑷在步驟⑵中制備的薄膜上涂上步驟⑶中所制備的PVA-Sbq/酶溶液，膜層的厚度為100μm，將薄膜置于紫外燈下30分鐘；

⑸在步驟⑷中所制備的薄膜上涂上一層含有6%炭黑和1.8%D6的溶液并自然風干。

2.一種肌酸酐含量檢測試劑盒，其特征在于：包括權利要求1所述制備的三層結構的肌酸酐含量檢測試劑。