[發(fā)明專(zhuān)利]一種腸道病毒71型可視化重組病毒及其應(yīng)用

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310363321.3
• 申請(qǐng)日: 2013-08-20
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN104419712A
• 公開(kāi)（公告）日: 2015-03-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 秦成峰;曹瑞源;秦鄂德;韓劍峰;李曉峰
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院微生物流行病研究所
• 主分類(lèi)號(hào): C12N15/41
• 分類(lèi)號(hào): C12N15/41;C12N7/01;C12N15/63;C12N5/10;C12N1/15;C12N1/19;C12N1/21;C12Q1/70;G01N33/577;G01N21/64
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 關(guān)暢

1.一種雙鏈DNA分子，為將CCPGCC標(biāo)簽的編碼基因插入腸道病毒71型的基因組DNA的3C蛋白酶編碼區(qū)中得到的DNA分子；所述CCPGCC標(biāo)簽為序列表的序列1所示的多肽片段。

2.如權(quán)利要求1所述的雙鏈DNA分子，其特征在于：所述CCPGCC標(biāo)簽的編碼基因如序列表的序列2所示。

3.如權(quán)利要求1或2所述的雙鏈DNA分子，其特征在于：所述腸道病毒71型為AH/08/06株。

4.如權(quán)利要求3所述的雙鏈DNA分子，其特征在于：所述AH/08/06株的基因組DNA如序列表的序列3所示。

5.如權(quán)利要求4所述的雙鏈DNA分子，其特征在于：所述雙鏈DNA分子如序列表的序列4所示。

6.含有權(quán)利要求1至5中任一所述雙鏈DNA分子的表達(dá)盒、重組載體、轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系或重組菌。

7.一種腸道病毒71型的重組病毒，其特征在于：其基因組RNA的編碼DNA如序列表的序列4所示。

8.如權(quán)利要求7所述的重組病毒，其特征在于：所述重組病毒的制備方法如下：將權(quán)利要求1至5中任一所述雙鏈DNA分子的RNA轉(zhuǎn)錄體感染哺乳動(dòng)物細(xì)胞并培養(yǎng)，得到所述重組病毒。

9.一種監(jiān)測(cè)腸道病毒71型感染哺乳細(xì)胞過(guò)程的方法，包括如下步驟：

（1）將權(quán)利要求7或8所述的重組病毒接種至哺乳動(dòng)物細(xì)胞；

（2）加入FlAsH-EDT2染料，通過(guò)觀察熒光信號(hào)檢測(cè)腸道病毒71型感染哺乳細(xì)胞過(guò)程。

10.一種篩選在腸道病毒71型感染哺乳細(xì)胞過(guò)程與3C^pro相互作用的宿主因子的方法，依次包括如下步驟：

（1）將權(quán)利要求7或8所述的重組病毒接種至哺乳動(dòng)物細(xì)胞；

（2）加入FlAsH-EDT2染料，并觀察熒光信號(hào)；

（3）加入針對(duì)候選的宿主因子的單克隆抗體并孵育；

（4）加入針對(duì)所述單克隆抗體的酶標(biāo)二抗，顯色后觀察熒光信號(hào)；

（5）將步驟（2）的熒光信號(hào)和步驟（4）的熒光信號(hào)進(jìn)行共定位處理，從而確定待測(cè)宿主因子是否為與3C^pro結(jié)合的宿主因子。