[發明專利]核酸和檢測轉基因水稻EB7001S及其衍生系的方法以及試劑盒及其用途

在審

• 申請號: 201310362525.5
• 申請日: 2013-08-19
• 公開（公告）號: CN104419708A
• 公開（公告）日: 2015-03-18
• 發明（設計）人: 肖國櫻;魏歲軍;鄧力華
• 申請（專利權）人: 中國科學院亞熱帶農業生態研究所
• 主分類號: C12N15/29
• 分類號: C12N15/29;C12Q1/68
• 代理公司: 北京潤平知識產權代理有限公司 11283
• 代理人: 李婉婉;王崇

技術領域

本發明涉及農業生物技術領域，具體地，涉及一種核酸、一種檢測轉基因水稻的方法、一種試劑盒以及該試劑盒在檢測轉基因水稻中的應用。

背景技術

水稻（Oryza?sativa?L.）作為世界上最重要的糧食作物之一，人們對其遺傳轉化和育種利用等方面進行了深入細致的研究。我國在水稻轉基因研究領域取得了一系列重大成果，很多轉基因水稻品種已被獲準進行環境釋放和生產性試驗，2009年轉Bt基因抗螟蟲水稻“華恢1號”和“Bt汕優63”獲得生產應用安全證書，標志著我國轉基因水稻具備了商業化生產的基本條件。為了平衡貿易利益、滿足公眾關切、控制潛在風險、加強工商監管，許多國家相繼建立了轉基因生物及其產品的安全評價和標識制度。我國現行對于農業轉基因生物的管理依據的是國務院2001年5月23日頒布的《農業轉基因生物安全管理條例》，以及農業部2002年1月5日發布的《農業轉基因生物安全評價管理辦法》、《農業轉基因生物進口安全管理辦法》和《農業轉基因生物標識管理辦法》3個配套規章。為了實現對轉基因生物及其產品的標識管理，保障轉基因產品的有效監管和轉基因產業的健康發展，對轉基因檢測技術的準確度和靈敏度提出了嚴格要求。

國際農業生物技術應用服務組織（International?Service?for?the?Acquisition?of?Agri-biotech?Applications,ISAAA）統計報告顯示，2012年全球28個國家種植轉基因作物，種植面積達到1.703億公頃，比2011年的1.6億公頃增長了6%。水稻是世界上最重要的糧食作物之一，自第1批轉基因水稻植株1988年問世以來，含有各種優良性狀，如抗蟲、抗除草劑、抗菌、抗病毒或營養改良的轉基因水稻相繼研發成功。但各國對轉基因水稻的商業化生產態度謹慎，1999年美國批準了2個抗除草劑轉基因水稻品種LL62和LL06的商業化種植，2004年伊朗開始規模化種植抗蟲轉基因水稻，2009年中國農業部批準了華中農業大學的轉Bt基因抗蟲水稻華恢1號和Bt汕優63的生產應用安全證書，但至今還沒有獲得品種審定，即商業化生產許可。

轉基因植物中外源基因在染色體上插入位置的旁側序列是轉基因植物品系最重要的分子特征之一，是區別不同轉化事件的唯一性標識，是建立轉基因植物品系特異性檢測方法的重要技術資料。如：王恒波等（轉基因大豆GTS40-3-2轉化事件特異性PCR檢測[J].基因組學與應用生物學,2010,(06):1177-83）建立了抗草甘膦轉基因大豆GTS40-3-2的品系特異性PCR檢測方法。翟志芳等（轉基因玉米LY038轉化事件的特異性檢測[J].農業生物技術學報,2011,(03):577-82.）采用修飾接頭連接PCR獲得了轉基因玉米LY038的外源基因與玉米基因組之間的5'端側翼序列，據此建立了轉基因玉米LY038轉化事件特異性定性檢測方法。就水稻而言，目前國內獲得了轉基因水稻克螟稻（轉Xa21基因水稻抗優97特異性檢測方法的建立;中國植物病理學會2006年學術年會,中國湖南長沙,F,2006[C]）、Bt汕優63（CN101824411A）、科豐6號（轉基因水稻Bt汕優63外源插入結構驗證和定量檢測方法建立[D];中國農業科學院,2008）、兩系早稻恢復系B2A68（201310068126.8：核酸和檢測轉基因水稻B2A68及其衍生系的方法以及試劑盒及其用途）等的外源插入片段的旁側序列，并建立了品系特異性的檢測方法。

利用密碼子優化的Epsps^#基因和Bar基因共同轉化水稻，可以獲得抗兩種除草劑的水稻（參考專利申請201110270905.7，CN102994526A）。既抗除草劑草甘膦，又抗除草劑草銨膦的轉基因水稻不育系不僅能方便除草，而且有利于實現機械化制種，還可以實現除草劑的交替使用、有效降低由于長期使用一種除草劑而導致雜草產生抗性的風險。本發明的發明人通過密碼子優化的Epsps^#基因和Bar基因轉化水稻，獲得了一個轉基因水稻新品系EB7001S。由于農桿菌轉化水稻外源基因的插入具有隨機性，轉基因水稻品系EB7001S的外源基因在基因組中插入位置并不清楚，因此，難以實現對轉基因水稻品系EB7001S的特異性檢測。

發明內容

本發明的目的是提供一種核酸及檢測含有該核酸的轉基因水稻品系的方法。