[發明專利]一種基于腺病毒AdC68的表達載體及其構建方法

在審

• 申請號: 201310362225.7
• 申請日: 2013-08-19
• 公開（公告）號: CN103937835A
• 公開（公告）日: 2014-07-23
• 發明（設計）人: 周東明;楊勇;丁妙
• 申請（專利權）人: 中國科學院上海巴斯德研究所
• 主分類號: C12N15/861
• 分類號: C12N15/861;A61K39/125;A61P31/14
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司 31100
• 代理人: 陳靜

1.一種制備腺病毒表達載體的方法，其特征在于，所述方法包括：將黑猩猩型腺病毒AdC68基因組分成4個片段，依次裝入到骨架載體中，并且，用連接序列替換AdC68基因組中E1的大部份編碼序列；所述的連接序列中，設置酶切位點I-Ceu?I和PI-Sce?I。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的4個片段分別是：

黑猩猩型腺病毒AdC68基因組第1-6025位；

黑猩猩型腺病毒AdC68基因組第6026-17279位；

黑猩猩型腺病毒AdC68基因組第17280-34196位；和

黑猩猩型腺病毒AdC68基因組第34197-36519位。

3.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的連接序列的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:1所示。

4.一種腺病毒表達載體，其特征在于，所述表達載體包括：改造的黑猩猩型腺病毒AdC68基因組序列；其中，E1的大部份編碼序列由連接序列替換；

所述的連接序列中設置酶切位點I-Ceu?I和PI-Sce?I。

5.如權利要求4所述的腺病毒表達載體，其特征在于，所述的連接序列的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:1所示。

6.如權利要求5所述的腺病毒表達載體，其特征在于，所述的腺病毒表達載體的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:2所示。

7.如權利要求5所述的表達載體，其特征在于，所述表達載體的酶切位點I-Ceu?I和PI-Sce?I之間，還包括外源的抗原編碼基因。

8.如權利要求7所述的表達載體，其特征在于，所述的外源的抗原是腸道病毒EV71的VP1抗原。

9.一種制備疫苗的方法，其特征在于，所述方法包括：

(1)提供權利要求4所述的腺病毒表達載體；

(2)將外源的抗原編碼基因插入到(1)表達載體的酶切位點I-Ceu?I和PI-SceI之間；

(3)將(2)的重組表達載體感染病毒生產細胞，病毒在細胞內包裝，從而獲得具有免疫原性的疫苗。

10.一種用于制備疫苗的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括：

權利要求4-8任一所述的腺病毒表達載體。

11.如權利要求10所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括：

病毒生產細胞；和/或

抗原編碼基因。