[發明專利]精氨酸在提高發酵培養氨基酸序列含有精氨酸-精氨酸的多肽的表達量中的應用及方法

有效

• 申請號: 201310361852.9
• 申請日: 2013-08-19
• 公開（公告）號: CN103589767A
• 公開（公告）日: 2014-02-19
• 發明（設計）人: 陳小鋒;李利佳;李曉平;鄭翔芳;張均;李文佳
• 申請（專利權）人: 宜昌長江藥業有限公司
• 主分類號: C12P21/02
• 分類號: C12P21/02;C12R1/84;C12R1/19
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 趙青朵;馮瓊

1.精氨酸在提高發酵培養氨基酸序列含有精氨酸-精氨酸的多肽的表達量中的應用。

2.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述多肽的表達系統為原核表達系統和真核表達系統。

3.根據權利要求2所述的應用，其特征在于，所述多肽的表達系統為酵母表達系統或哺乳動物細胞表達系統。

4.根據權利要求3所述的應用，其特征在于，所述多肽的表達系統為酵母表達系統。

5.根據權利要求4所述的應用，其特征在于，所述酵母表達系統中宿主細胞選自畢赤酵母屬。

6.根據權利要求5所述的應用，其特征在于，所述畢赤酵母的菌株為GS115或X33。

7.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述多肽為甘精胰島素前體或豬蛔蟲抗菌肽cecropin?P1。

8.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述多肽為甘精胰島素前體。

9.根據權利要求8所述的應用，其特征在于，所述甘精胰島素前體的C肽序列為SEQ?ID?NO:1所示氨基酸序列、SEQ?ID?NO:2所示氨基酸序列、SEQ?ID?NO:3所示氨基酸序列、SEQ?ID?NO:4所示氨基酸序列或SEQ?ID?NO:5所示氨基酸序列。

10.根據權利要求8所述的應用，其特征在于，所述甘精胰島素前體無C肽。

11.一種提高氨基酸序列含有精氨酸-精氨酸的多肽的表達量的方法，其特征在于，包括如下步驟：

取基因工程構建菌株經第一接種到種子培養基中，經第一培養獲得種子液；

取所述種子液經第二接種到發酵培養基中，經第二培養獲得培養液，經誘導表達蛋白，即得；

所述發酵培養基中添加精氨酸。

12.根據權利要求11所述的方法，其特征在于，以g/mL計，所述精氨酸與所述發酵培養基的質量體積比為0.087～1.74:100。

13.根據權利要求11所述的方法，其特征在于，以g/mL計，所述精氨酸與所述發酵培養基的質量體積比為0.17～1.39:100。

14.根據權利要求11所述的方法，其特征在于，以g/mL計，所述精氨酸與所述發酵培養基的質量體積比為0.61～1.13:100。

15.一種提高甘精胰島素前體表達量的方法，其特征在于，包括如下步驟：

取基因工程構建甘精胰島素前體序列的畢赤酵母菌株接種到種子培養基中，振蕩培養獲得種子液；

取所述種子液接種到添加了精氨酸的發酵培養基中，振蕩培養，誘導表達蛋白，即得。

16.一種提高豬蛔蟲抗菌肽cecropin?P1表達量的方法，其特征在于，包括如下步驟：

取基因工程構建cecropin?P1的大腸桿菌接種到種子培養基中，振蕩培養獲得第一種子液；

取所述第一種子液接種到發酵培養基中，振蕩培養獲得第二種子液；

取所述第二種子液加入精氨酸獲得培養液，振蕩培養，即得；

以g/mL計，所述精氨酸與所述培養液的質量體積比為0.5%。

17.一種提高甘精胰島素前體表達量的方法，其特征在于，包括如下步驟：

取基因工程構建甘精胰島素前體序列的動物細胞，復蘇、稀釋后接種于培養液中獲得細胞液；

取所述細胞液振蕩培養，獲得第一培養液；

取所述第一培養液接種于添加精氨酸的培養液中傳代培養，即得。