[發明專利]一種PK15細胞制備豬圓環Ⅱ型病毒疫苗的培養基及其使用方法

在審

• 申請號: 201310361844.4
• 申請日: 2013-08-13
• 公開（公告）號: CN103409364A
• 公開（公告）日: 2013-11-27
• 發明（設計）人: 賈馨丹
• 申請（專利權）人: 江蘇太一生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071;C12N7/02;A61K39/12;A61P31/20
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于生物制品領域，涉及一種培養基的配制和使用方法，更具體的，涉及一種用于在大規模高密度生長環境的培養PK15細胞制備豬圓環II型病毒疫苗的培養基。

背景技術

通過動物細胞培養制備最終產品，是生物制品領域最常用的生產方式之一。用于動物細胞培養的培養基，絕大部分需要加入10％-15％的動物血清，以提供細胞生長所需的營養成分及細胞保持正常形態的支持蛋白。但是，動物血清也有其明顯的缺點：成分難以明確，產品批間差異不易控制，價格昂貴，并且要求極其嚴格的檢測程序以確保血清中不含有血清來源動物可能攜帶的細菌、病毒等。

PK15細胞廣泛用于生物制品領域，尤其是疫苗的制備。使用PK15細胞制備豬圓環II型病毒疫苗是近年來豬圓環II型病毒疫苗生產的一個新趨勢。生物反應器及多種適合的載體己被廣泛應用于動物細胞培養，其優點在于，許多種類的生物反應器可以通過灌流培養的方式實現大規模高密度培養動物細胞。為達到良好的培養效果，生物反應器的參數設置和所選培養基的成分是其中的重要因素。目前，針對使用生物反應器大規模高密度培養PK15細胞制備豬圓環II型病毒疫苗的培養基研究較少，仍然需要更深入的研究。

發明內容

本發明提供一種適用于大規模高密度培養PK15細胞制備豬圓環II型病毒疫苗的培養基及其使用方法。使用本發明所述的培養基，使PK15細胞的大規模高密度培養在低血清濃度條件下進行。接種豬圓環II型病毒后，使用本發明所述的無血清、低蛋白的培養基用來維持病毒在細胞液中的增殖。本發明提供的培養基及其使用方法，使PK15細胞高效貼附在微載體上，細胞生長過程中生長速度快，細胞形態好，在灌流培養方式下可以在3-7天內達到極高密度；接種豬圓環II型病毒后，在維持培養基培養下，可以連續收獲病毒液12-17天。

本發明的一種大規模高密度培養PK15細胞制備豬圓環II型病毒疫苗的培養基，其組成成分及重量份為：

上述培養基的組成成分及重量份優選為：

上述培養基，在使用前加入1％-2％的胎牛血清或小牛血清，經過膜過濾制成在大規模高密度環境下使用的培養PK15細胞的培養液。

本發明的一種大規模高密度培養得到PK15細胞接入豬圓環II型病毒后，維持病毒感染時期的培養基，其組成成分及重量份為：

上述培養基的組成成分及重量份優選為：

上述培養基還包含如下成分及其重量比例：

上述培養基包含的添加成分，其重量份的優選比例為：

所述大規模高密度培養PK15細胞所用的生物反應器可使用本領域常用的內部結構支持使用載體的各類生物反應器，例如德國Eppendorf(艾本德)公司New?Brunswick?Scientific生物反應器，德國Satorious公司生物反應器，荷蘭Applicon公司生物反應器生物反應器，杭州安普公司生物反應器，上海日泰公司生物反應器，廣州齊志公司生物反應器。優選使用德國Eppendorf(艾本德)公司New?Brunswick?Scientific生物反應器，德國Satorious公司生物反應器，荷蘭Applicon公司生物反應器，更優選使用德國Eppendorf(艾本德)公司New?Brunswick?Scientific生物反應器。

所述載體可選自常規使用的各種材料制的載體，包括化工材料的聚丙烯，PLA，PGA，多孔硅，PLGA，PPF等，和天然材料的葡聚糖，膠原蛋白，瓊脂，谷物蛋白等。優選使用葡聚糖材料的微載體，更優選使用美國GE公司Cytodexl球形微載體。

所述PK15細胞培養的條件是本領域中常規的使用條件，生物反應器的參數設置參考生物反應器廠家的使用說明書設置。優選的培養條件是：37℃，溶氧DO為30-50％，按比例通入壓縮空氣，氧氣，二氧化碳和氮氣四種氣體，通氣量為1.0L/min，轉速為110rpm。