[發(fā)明專(zhuān)利]一株共生真菌及其在鐵皮石斛組培與種植階段的應(yīng)用

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310361106.X
• 申請(qǐng)日: 2013-08-19
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103421695A
• 公開(kāi)（公告）日: 2013-12-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 虞龍;姚馳亞
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 虞龍
• 主分類(lèi)號(hào): C12N1/14
• 分類(lèi)號(hào): C12N1/14;C12N15/01;A01H4/00;A01G31/00;C12R1/645
• 代理公司: 南京經(jīng)緯專(zhuān)利商標(biāo)代理有限公司 32200
• 代理人: 王月霞

1.一種共生真菌(Epulorhiza?sp.)?Es-N235，已保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心CCTCC，保藏編號(hào)：CCTCC?NO：M2013274。

2.權(quán)利要求1所述的共生真菌Es-N235在鐵皮石斛組培與種植階段的應(yīng)用。

3.權(quán)利要求2所述的共生真菌Es-N235在鐵皮石斛組培與種植階段的應(yīng)用，其特征在于包括如下步驟：

1）平板培養(yǎng)：將共生真菌Es-N235接種至PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為25~30℃，培養(yǎng)時(shí)間為2~3d；

2）斜面培養(yǎng)：將步驟1）PDA培養(yǎng)基培養(yǎng)的共生真菌接種至斜面培養(yǎng)基培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為25~30℃，培養(yǎng)時(shí)間為2~3d；

3）種子培養(yǎng)：將步驟2）中的共生真菌的斜面培養(yǎng)物接種至種子培養(yǎng)基培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為25~35℃，培養(yǎng)時(shí)間12~24h；

4）鐵皮石斛苗的無(wú)菌組培：鐵皮石斛苗在無(wú)菌組培培養(yǎng)基進(jìn)行無(wú)菌組培，光照培養(yǎng)；

5）鐵皮石斛苗與共生真菌共生培養(yǎng)：將步驟3）中的種子培養(yǎng)基培養(yǎng)物在無(wú)菌條件下，接入步驟4)的鐵皮石斛苗群幾何中心處共同培養(yǎng)，接入量為10%~30%(v/v),培養(yǎng)溫度25~30℃，光照培養(yǎng)，光照強(qiáng)度3000~8000Lux，光照時(shí)間12~16h/d，培養(yǎng)14~21d；

6）大田無(wú)土栽培：將步驟5)中的共同培養(yǎng)的鐵皮石斛幼苗接種至大田進(jìn)行無(wú)土栽培，培養(yǎng)溫度25~30℃，光照強(qiáng)度5000~8000Lux，光照時(shí)間12~16h/d，培養(yǎng)至長(zhǎng)出植株。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的共生真菌在鐵皮石斛組培與種植階段的應(yīng)用，其特征在于：所述步驟1）中PDA平板培養(yǎng)基包含如下質(zhì)量百分?jǐn)?shù)的組分：馬鈴薯煮汁20%~30%，碳源5%~10%，無(wú)機(jī)鹽0.03%~0.1%，瓊脂1%~3%，其余為水，其中所述碳源為葡萄糖，蔗糖中的一種或多種混合；所述無(wú)機(jī)鹽為鈉鹽，鉀鹽或者鎂鹽中的一種或幾種混合。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的共生真菌在鐵皮石斛組培與種植階段的應(yīng)用，其特征在于所述斜面培養(yǎng)基包含如下質(zhì)量百分?jǐn)?shù)的組分：馬鈴薯煮汁15%~25%，碳源5%~10%,無(wú)機(jī)鹽0.03%~0.1%，瓊脂粉1%~3%，其余為水，其中所述碳源為葡萄糖，蔗糖中的一種或多種混合；所述無(wú)機(jī)鹽為鈉鹽，鉀鹽或者鎂鹽中的一種或幾種混合。

6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的共生真菌在鐵皮石斛組培與種植階段的應(yīng)用，其特征在于所述種子培養(yǎng)基包含如下質(zhì)量百分?jǐn)?shù)的組分：馬鈴薯煮汁25%~35%，碳源10%~15%,無(wú)機(jī)鹽0.05%~0.12%，其余為水，其中所述碳源為葡萄糖，蔗糖中的一種或多種混合；所述無(wú)機(jī)鹽為鈉鹽，鉀鹽，或者鎂鹽中的一種或幾種混合。

7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的共生真菌在鐵皮石斛組培與種植階段的應(yīng)用，其特征在于所述鐵皮石斛苗的無(wú)菌組培培養(yǎng)基包含如下質(zhì)量分?jǐn)?shù)的組分：馬鈴薯煮汁15%~25%，1/2MS培養(yǎng)基，碳源2%~5%，肌醇0.06%~0.1%，瓊脂粉0.5%~1%，pH為5.0~6.5。