[發明專利]一種檢測小腸結腸炎耶爾森氏菌的核酸側向流試紙條的制備方法及其應用無效
| 申請號： | 201310360915.9 | 申請日： | 2013-08-19 |
| 公開（公告）號： | CN103789404A | 公開（公告）日： | 2014-05-14 |
| 發明（設計）人： | 鄭文杰;李宗夢;張宏偉;劉培;曲鵬;奚文輝;郝育杰;尹長城;劉斯奇 | 申請（專利權）人： | 天津出入境檢驗檢疫局動植物與食品檢測中心 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68;C12Q1/10 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 300461 天津市*** | 國省代碼： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 檢測 小腸 結腸炎 耶爾森氏菌 核酸 側向 試紙 制備 方法 及其 應用 | ||
1.本發明提供一種食源性病原微生物-小腸結腸炎耶爾森氏菌(Yersinia?enterocolitica)的試紙條快速檢測方法。
2.如權利要求1所述的檢測方法，采用兩條獨特設計的引物PCR進行擴增反
應，其中上游引物Ail-F的序列為：5′-TAATGTGTACGCTGCGAG-3′，下游引物Ail-R的序列為5′-?GACGTCTTACTTGCACTG-3′，上游引物和下游引物的5’末端分別進行半抗原或熒光素分子標記。
3.如權利要求1所述的檢測方法使用帶有核酸變性劑的展開緩沖液完成試紙條上的層析，其成分為：10mM?Tris、1%?BSA、1%?Tween?20以及濃度分別為0.05mol/L到0.5mol/L的NaOH。
4.權利要求1所述的用于核酸擴增產物檢測的試紙條，其中有色顆粒是膠體金顆粒或乳膠顆粒，所述的纖維膜為硝酸纖維素膜或尼龍膜。
5.如權利要求2所述的PCR過程，引物的標記可以選擇生物素分子（Biotin）、異硫氰酸熒光素（FITC）或地高辛（Digoxin）中兩種不同的成分標記。
6.如權利要求2所述的PCR過程，其反應條件為：95?℃預變性5?min，94?℃變性30?sec；57?℃退火?30?sec；72?℃延伸????30sec，擴增30個循環，最后72?℃延伸5?min。
7.權利要求1所述的PCR-免疫膠體金試紙條用于食源性病原微生物小腸結腸炎耶爾森氏菌的擴增及通過免疫膠體金技術進行檢測的用途。
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