[發明專利]利用鏈格孢屬微生物胞內酶轉化葡萄糖生成白藜蘆醇的方法

有效

• 申請號: 201310359908.7
• 申請日: 2013-08-19
• 公開（公告）號: CN103484505A
• 公開（公告）日: 2014-01-01
• 發明（設計）人: 師俊玲;車金鑫
• 申請（專利權）人: 師俊玲
• 主分類號: C12P7/22
• 分類號: C12P7/22;C12R1/645
• 代理公司: 西安新思維專利商標事務所有限公司 61114
• 代理人: 韓翎

1.利用鏈格孢屬微生物胞內酶轉化葡萄糖生成白藜蘆醇的方法，其特征在于：

由以下步驟實現：

步驟一：酶液的制備：

（1）將鏈格孢屬CCTCC?No:?M2011348菌株接種于液體培養基中，在28℃、120?rpm的條件下培養4天；

（2）取培養物用過濾法收集菌絲體，并用蒸餾水沖洗干凈；

（3）將所得菌絲體在液氮中研磨破碎，按每4.0?g?菌絲體加入8?ml粗酶提取液的比例加入粗酶提取液，混合均勻后，在溫度4℃、轉速1000rpm的條件下離心10min，收集上清液；

（4）在上清液中加入固體硫酸銨至其飽和濃度為75%，4℃靜置過夜后在1000rpm轉速下離心10?min，收集沉淀并用（3）中的粗酶提取液溶解后放入透析袋中，在4℃透析至無SO₄^2－檢出為至，透析袋中所得液體即為粗酶液；

步驟二：生成白藜蘆醇：

取100?mL緩沖液，加入步驟一得到的粗酶液5-50?mL，在溫度37℃、轉速120?rpm的條件下反應0.5～4?h，得到白藜蘆醇。

2.根據權利要求1所述的利用鏈格孢屬微生物胞內酶轉化葡萄糖生成白藜蘆醇的方法，其特征在于：

步驟一（1）中，所述液體培養基為土豆汁葡萄糖液體培養基，配方為：?20%的馬鈴薯浸汁1000mL，葡萄糖20?g，pH?自然。

3.根據權利要求2所述的利用鏈格孢屬微生物胞內酶轉化葡萄糖生成白藜蘆醇的方法，其特征在于：

步驟一（3）中，所述粗酶提取液為磷酸鹽緩沖溶液，摩爾濃度為50mmol/L，?pH為7，其中含有0.1g/L硫酸鎂、0.2g/L硫酸鈣、0.6mmol/L?DTT。

4.根據權利要求3所述的利用鏈格孢屬微生物胞內酶轉化葡萄糖生成白藜蘆醇的方法，其特征在于：

步驟一中，得到的粗酶液制備成固定化酶，具體步驟為：

在200mL燒杯中加入2g海藻酸鈉和50ml蒸餾水，加熱攪拌，使其完全混合，待冷卻后，加入10mL步驟一得到的粗酶液混合，用注射器滴入1%氯化鈣溶液中，放置在4℃環境中固定化1?h后，用蒸餾水清洗數遍放置于4℃蒸餾水中保存備用。

5.根據權利要求4所述的利用鏈格孢屬微生物胞內酶轉化葡萄糖生成白藜蘆醇的方法，其特征在于：

步驟二中，所述緩沖液為含有0.1?g/L硫酸鎂、0.2?g/L硫酸鈣和0.5-10.0?mmol/L葡萄糖的50?mmol/L的磷酸緩沖溶液、0.1mol/L檸檬酸緩沖溶液或50?mmol/L?Tris-HCl緩沖溶液，pH為3-7.5。

6.根據權利要求5所述的利用鏈格孢屬微生物胞內酶轉化葡萄糖生成白藜蘆醇的方法，其特征在于：

步驟二中，反應體系中分別加入0.2?mg/100?mL的丙二酰輔酶A、ATP、輔酶A、對-香豆酸或苯丙氨酸。