[發(fā)明專利]水稻Os74蛋白及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310356087.1
• 申請(qǐng)日: 2013-08-15
• 公開（公告）號(hào): CN103421841A
• 公開（公告）日: 2013-12-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 郭澤建;邢啟凱;陳旭君
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N15/84
• 分類號(hào): C12N15/84;C12N15/66;A01H5/00
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 關(guān)暢

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及水稻Os74蛋白及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

植物在生長(zhǎng)過(guò)程中會(huì)受到多種病原菌及昆蟲的侵害。為此，植物進(jìn)化出許多防衛(wèi)機(jī)制來(lái)抵抗這些病原菌的侵害。其中，抗病基因（Resistance?gene）介導(dǎo)的防衛(wèi)反應(yīng)是一個(gè)重要的防衛(wèi)機(jī)制。近年來(lái)，在一系列物種中克隆了許多抗病基因。大多數(shù)抗病基因編碼的蛋白由核苷酸結(jié)合區(qū)域（nucleotide-binding?region，NB）和C末端的亮氨酸重復(fù)區(qū)域（leucine-rich?repeat，LRR）組成，這種蛋白被稱為NB-LRR蛋白。當(dāng)病原菌存在時(shí)，NB-LRR蛋白可以識(shí)別病原菌中對(duì)應(yīng)的效應(yīng)蛋白并激活防衛(wèi)反應(yīng)。通常情況下，這些防衛(wèi)反應(yīng)伴隨著接種點(diǎn)處出現(xiàn)的過(guò)敏反應(yīng)，如活性氧的迸發(fā)、病原相關(guān)基因（pathogenesis-related?genes）的誘導(dǎo)表達(dá)以及系統(tǒng)獲得抗性（systemic?acquired?resistance）的建立，這些反應(yīng)使植物體抗病。因此，植物新抗病基因的發(fā)掘，對(duì)理解植物和病原菌的相互作用機(jī)制及作物的遺傳改良具有重要意義。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供水稻Os74蛋白及其應(yīng)用。

本發(fā)明提供的是如下任一物質(zhì)在提高粳稻的抗病性中的應(yīng)用：

（1）SEQ?ID?No.2所示Os74蛋白；

（2）SEQ?ID?No.2所示Os74蛋白的編碼基因；

（3）含有（2）所述編碼基因的重組載體、表達(dá)盒、轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系或重組菌。

上述應(yīng)用中，所述抗病性為抗水稻白葉枯病。

上述應(yīng)用中，所述編碼基因的核苷酸序列如SEQ?ID?No.1中自5’末端起第809-3190位核苷酸所示。

干擾載體在降低粳稻的抗病性中的應(yīng)用也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。

上述應(yīng)用中，所述干擾載體按照如下方法制備：將SEQ?ID?No.1中自5’末端起第557-1023位核苷酸所示DNA片段插入出發(fā)載體pCDU-d40-IN的Kpn?Ⅰ和PmaC?Ⅰ位點(diǎn)間，得到中間載體；將SEQ?ID?No.1中自5’末端起第557-1023位核苷酸所示DNA片段的反向互補(bǔ)片段插入中間載體的Hind?Ⅲ和Sma?Ⅰ位點(diǎn)間，最終得到干擾載體。

上述應(yīng)用中，所述pCDU-d40-IN載體按照如下方法制備：

（1）以中花17的基因組為模板，以O(shè)W40BKF和OW40SPmR為引物擴(kuò)增OsWRKY40基因的干涉片段；

（2）將擴(kuò)增得到的OsWRKY40基因的干涉片段連接pMD-18T，得到pMD18-T-W40-B；

（3）BamH?Ⅰ和Sal?Ⅰ雙酶切pMD18-T-W40-B，得到基因片段；BamH?Ⅰ和Xho?Ⅰ雙酶切pUC-Catin，得到載體大片段；將基因片段與載體大片段連接得到重組質(zhì)粒pUC-40-IN；

（4）BamH?Ⅰ和HindⅢ雙酶切pUC-40-IN，得到基因片段；BamH?Ⅰ和HindⅢ雙酶切pBS-sk-Ubi載體，得到載體大片段；將基因片段與載體大片段連接得到重組質(zhì)粒pBS-W40-IN；

（5）以中花17的基因組為模板，以O(shè)W40SmF和OW40H3R為引物擴(kuò)增OsWRKY40基因的干涉片段；

（6）將擴(kuò)增得到的OsWRKY40基因的干涉片段連接pMD-18T，得到pMD18T-W40-H；

（7）Sma?Ⅰ和HindⅢ雙酶切pMD18T-W40-H，得到基因片段；Sma?Ⅰ和HindⅢ雙酶切pCoUbi:Flag-OsERF922載體，得到載體大片段；將基因片段與載體大片段連接，得到重組質(zhì)粒pCDU-W40；

（8）用EcoR?Ⅰ和HindⅢ雙酶切pBS-W40-IN，得到基因片段；EcoR?Ⅰ和HindⅢ雙酶切pCDU-W40，得到載體大片段；將基因片段與載體大片段連接得到重組質(zhì)粒pCDU-d40-IN。

所述OW40BKF的序列為5’-ATGGATCCGGTACCATGGATCTGATGGGTGG-3’；

所述OW40SPmR的序列為5’-TTGTCGACACGTGGCCGGTGCGGTTCAG-3’；

所述OW40SmF的序列為5’-TACCCGGGATCTGATGGGTGGGTACG-3’；

所述和OW40H3R的序列為5’-GTAAGCTTCAGCATGGAGATCACCTTCTTG-3’；

上述應(yīng)用中，所述pBS-sk-Ubi載體按照如下方法制備：