[發明專利]水稻Os74蛋白及其應用

有效

• 申請號: 201310356087.1
• 申請日: 2013-08-15
• 公開（公告）號: CN103421841A
• 公開（公告）日: 2013-12-04
• 發明（設計）人: 郭澤建;邢啟凱;陳旭君
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: C12N15/84
• 分類號: C12N15/84;C12N15/66;A01H5/00
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

1.如下任一物質在提高粳稻的抗病性中的應用：?

（1）SEQ?ID?No.2所示Os74蛋白；?

（2）SEQ?ID?No.2所示Os74蛋白的編碼基因；?

（3）含有（2）所述編碼基因的重組載體、表達盒、轉基因細胞系或重組菌；?

所述抗病性為抗水稻白葉枯病；?

所述編碼基因的核苷酸序列如SEQ?ID?No.1中自5’末端起第809-3190位核苷酸所示。?

2.干擾載體在降低粳稻的抗病性中的應用；?

所述干擾載體按照如下方法制備：將SEQ?ID?No.1中自5’末端起第557-1023位核苷酸所示DNA片段插入出發載體pCDU-d40-IN的Kpn?Ⅰ和PmaC?Ⅰ位點間，得到中間載體；將SEQ?ID?No.1中自5’末端起第557-1023位核苷酸所示DNA片段的反向互補片段插入中間載體的Hind?Ⅲ和Sma?Ⅰ位點間，最終得到干擾載體；?

所述pCDU-d40-IN載體按照如下方法制備：?

（1）以中花17的基因組為模板，以OW40BKF和OW40SPmR為引物擴增OsWRKY40基因的干涉片段；?

（2）將擴增得到的OsWRKY40基因的干涉片段連接pMD-18T，得到pMD18-T-W40-B；?

（3）BamH?Ⅰ和Sal?Ⅰ雙酶切pMD18-T-W40-B，得到基因片段；BamH?Ⅰ和Xho?Ⅰ雙酶切pUC-Catin，得到載體大片段；將基因片段與載體大片段連接得到重組質粒pUC-40-IN；?

（4）BamH?Ⅰ和HindⅢ雙酶切pUC-40-IN，得到基因片段；BamH?Ⅰ和HindⅢ雙酶切pBS-sk-Ubi載體，得到載體大片段；將基因片段與載體大片段連接得到重組質粒pBS-W40-IN；?

（5）以中花17的基因組為模板，以OW40SmF和OW40H3R為引物擴增OsWRKY40基因的干涉片段；?

（6）將擴增得到的OsWRKY40基因的干涉片段連接pMD-18T，得到pMD18T-W40-H；?

（7）Sma?Ⅰ和HindⅢ雙酶切pMD18T-W40-H，得到基因片段；Sma?Ⅰ和HindⅢ雙酶切pCoUbi:Flag-OsERF922載體，得到載體大片段；將基因片段與載體大片段連接，得到重組質粒pCDU-W40；?

（8）用EcoR?Ⅰ和HindⅢ雙酶切pBS-W40-IN，得到基因片段；EcoR?Ⅰ和HindⅢ雙酶切pCDU-W40，得到載體大片段；將基因片段與載體大片段連接得到重組質粒pCDU-d40-IN；?

所述OW40BKF的序列為5’-ATGGATCCGGTACCATGGATCTGATGGGTGG-3’；?

所述OW40SPmR的序列為5’-TTGTCGACACGTGGCCGGTGCGGTTCAG-3’；?

所述OW40SmF的序列為5’-TACCCGGGATCTGATGGGTGGGTACG-3’；?

所述和OW40H3R的序列為5’-GTAAGCTTCAGCATGGAGATCACCTTCTTG-3’；?

所述pBS-sk-Ubi載體按照如下方法制備：?

用Pvu?Ⅱ和Sac?Ⅰ雙酶切pCoU載體，得到基因片段；用Pvu?Ⅱ和Sac?Ⅰ雙酶切pBluescript?SK，得到載體大片段；將基因片段與載體大片段連接，得到重組載體，將其命名為pBS-sk-Ubi；?

所述抗病性為抗水稻稻瘟病或水稻白葉枯病。?

3.根據權利要求1或2所述的應用，其特征在于：所述水稻稻瘟病是由水稻稻瘟病菌引起的；所述水稻白葉枯病是由水稻白葉枯病菌引起的。?

4.一種制備水稻白葉枯病的抗病性增強的轉基因水稻的方法，包括如下步驟：將SEQ?ID?No.2所示Os74蛋白的編碼基因導入出發粳稻中，得到轉基因粳稻；與出發粳稻相比，轉基因粳稻的水稻白葉枯病的抗病性增強；?

所述編碼基因是通過重組表達載體導入所述植物中的，所述重組表達載體是將所述編碼基因插入出發載體pCoUbi:Flag-OsERF922的多克隆位點得到的；?

所述編碼基因的核苷酸序列如SEQ?ID?No.1中自5’末端起第809-3190位核苷酸所示。?