[發(fā)明專利]一種用傳代細(xì)胞源生產(chǎn)豬偽狂犬病活疫苗的方法及其制品

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310355677.2
• 申請(qǐng)日: 2013-08-15
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN104367996B
• 公開(kāi)（公告）日: 2017-09-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張?jiān)S科;孫進(jìn)忠;田克恭
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 普萊柯生物工程股份有限公司
• 主分類號(hào): A61K39/245
• 分類號(hào): A61K39/245;A61P31/22;C12N7/00
• 代理公司: 北京華夏正合知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙)11017
• 代理人: 韓登營(yíng)

1.一種用傳代細(xì)胞源生產(chǎn)偽狂犬病活疫苗的方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)用傳代細(xì)胞培養(yǎng)偽狂犬病病毒弱毒株；

(2)收獲病毒液；

(3)加穩(wěn)定劑，經(jīng)冷凍真空干燥得到傳代細(xì)胞源豬偽狂犬病活疫苗,

其中所述步驟(2)包括如下步驟：接毒后24h～44h收獲細(xì)胞培養(yǎng)毒液，收獲的毒液置于0℃-8℃保存,

所述的穩(wěn)定劑包括海藻糖、L-谷氨酸鈉和維生素C。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用傳代細(xì)胞源生產(chǎn)偽狂犬病活疫苗的方法，其特征在于，所述步驟(1)包括如下步驟：

(1a)制苗用細(xì)胞的傳代與培養(yǎng)：所述傳代細(xì)胞經(jīng)胰酶細(xì)胞分散消化傳代，用細(xì)胞生長(zhǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，形成傳代細(xì)胞單層；

(1b)細(xì)胞毒種的繁殖：將所述偽狂犬病病毒弱毒株接種至所述步驟(1a)中得到的傳代細(xì)胞單層，用細(xì)胞維持液繼續(xù)培養(yǎng)；24h～44h后收獲細(xì)胞培養(yǎng)病毒液作為生產(chǎn)用毒種；

(1c)制苗毒液繁殖：取所述步驟(1a)中得到的傳代細(xì)胞單層，棄去所述細(xì)胞生長(zhǎng)液，接種所述步驟(1b)中得到的生產(chǎn)用毒種，繼續(xù)培養(yǎng)。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種用傳代細(xì)胞源生產(chǎn)偽狂犬病活疫苗的方法，其特征在于，所述步驟(1a)、(1b)、(1c)中的細(xì)胞培養(yǎng)所用的溫度為36℃～38℃；所述步驟(1b)、(1c)中的接種時(shí)的接種量為1％～2％體積百分比的生產(chǎn)用細(xì)胞毒種的維持液；所述步驟(1a)中的細(xì)胞生長(zhǎng)液含90％～97％體積百分比的MEM液和3％～10％體積比的胎牛血清，所述細(xì)胞生長(zhǎng)液的pH值為7.0～8.0；所述步驟(1b)、(1c)中的細(xì)胞維持液含95％～99％體積百分比的MEM液和1％～5％體積比的胎牛血清，所述細(xì)胞維持液的pH值為7.1～7.5。

4.根據(jù)權(quán)利要求1～3所述的一種用傳代細(xì)胞源生產(chǎn)偽狂犬病活疫苗的方法，其特征在于，所述傳代細(xì)胞為豬睪丸傳代細(xì)胞ST、豬腎傳代細(xì)胞PK15或豬腎傳代細(xì)胞IBRS-2。