[發明專利]一種用傳代細胞源生產豬偽狂犬病活疫苗的方法及其制品

有效

• 申請號: 201310355677.2
• 申請日: 2013-08-15
• 公開（公告）號: CN104367996B
• 公開（公告）日: 2017-09-05
• 發明（設計）人: 張許科;孫進忠;田克恭
• 申請（專利權）人: 普萊柯生物工程股份有限公司
• 主分類號: A61K39/245
• 分類號: A61K39/245;A61P31/22;C12N7/00
• 代理公司: 北京華夏正合知識產權代理事務所(普通合伙)11017
• 代理人: 韓登營

1.一種用傳代細胞源生產偽狂犬病活疫苗的方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)用傳代細胞培養偽狂犬病病毒弱毒株；

(2)收獲病毒液；

(3)加穩定劑，經冷凍真空干燥得到傳代細胞源豬偽狂犬病活疫苗,

其中所述步驟(2)包括如下步驟：接毒后24h～44h收獲細胞培養毒液，收獲的毒液置于0℃-8℃保存,

所述的穩定劑包括海藻糖、L-谷氨酸鈉和維生素C。

2.根據權利要求1所述的一種用傳代細胞源生產偽狂犬病活疫苗的方法，其特征在于，所述步驟(1)包括如下步驟：

(1a)制苗用細胞的傳代與培養：所述傳代細胞經胰酶細胞分散消化傳代，用細胞生長液繼續培養，形成傳代細胞單層；

(1b)細胞毒種的繁殖：將所述偽狂犬病病毒弱毒株接種至所述步驟(1a)中得到的傳代細胞單層，用細胞維持液繼續培養；24h～44h后收獲細胞培養病毒液作為生產用毒種；

(1c)制苗毒液繁殖：取所述步驟(1a)中得到的傳代細胞單層，棄去所述細胞生長液，接種所述步驟(1b)中得到的生產用毒種，繼續培養。

3.根據權利要求2所述的一種用傳代細胞源生產偽狂犬病活疫苗的方法，其特征在于，所述步驟(1a)、(1b)、(1c)中的細胞培養所用的溫度為36℃～38℃；所述步驟(1b)、(1c)中的接種時的接種量為1％～2％體積百分比的生產用細胞毒種的維持液；所述步驟(1a)中的細胞生長液含90％～97％體積百分比的MEM液和3％～10％體積比的胎牛血清，所述細胞生長液的pH值為7.0～8.0；所述步驟(1b)、(1c)中的細胞維持液含95％～99％體積百分比的MEM液和1％～5％體積比的胎牛血清，所述細胞維持液的pH值為7.1～7.5。

4.根據權利要求1～3所述的一種用傳代細胞源生產偽狂犬病活疫苗的方法，其特征在于，所述傳代細胞為豬睪丸傳代細胞ST、豬腎傳代細胞PK15或豬腎傳代細胞IBRS-2。