[發(fā)明專利]一種人血白蛋白的制備工藝

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310355272.9
• 申請日: 2013-08-15
• 公開（公告）號: CN103394076A
• 公開（公告）日: 2013-11-20
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 梁小明;徐建新;廖昕晰;何淑琴;鄧志華;黃璠
• 申請（專利權(quán)）人: 江西博雅生物制藥股份有限公司
• 主分類號: A61K38/38
• 分類號: A61K38/38;A61K9/08;A61P7/08;C07K14/765;C07K1/30
• 代理公司: 南昌新天下專利商標(biāo)代理有限公司 36115
• 代理人: 施秀瑾

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物制藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及蛋白質(zhì)藥物的分離及純化工藝，特別是涉及一種人血白蛋白的制備工藝。

背景技術(shù)

人血白蛋白是血液制劑的主要產(chǎn)品，也是血漿蛋白生產(chǎn)工藝主干的最終產(chǎn)物。白蛋白在肝細(xì)胞合成速度極快，具有分子相對小(分子量66250)、表面積相對較大，分子構(gòu)形比較對稱，結(jié)構(gòu)簡單、牢固、富韌性等特點。白蛋白對失血性休克，嚴(yán)重?zé)齻X水腫，肝腎疾病的血癥有重要作用。自從Cohn等人于40年代創(chuàng)立低溫乙醇人血漿蛋白分離技術(shù)以來，血漿蛋白的工業(yè)化大生產(chǎn)取得了長足的進展。

目前采用低溫乙醇分離法生產(chǎn)人血白蛋白的廠家，多數(shù)存在白蛋白得率低，產(chǎn)品穩(wěn)定性差，純度低，其他部分指標(biāo)容易不達標(biāo)，如PKA含量，鋁殘留量，多聚體含量等。出現(xiàn)以上不足的主要原因還是制備工藝的不合理。目前大多數(shù)制備工藝中分離組分多采用離心分離法，而組分在高速離心過程中，因離心機的升溫作用容易造成部分應(yīng)沉淀的雜蛋白溶解而無法除去，留下了不穩(wěn)定因素。二者高速的離心過程，產(chǎn)生強大的離心剪切力，易破壞蛋白質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)，勢必降低白蛋白的得率，影響制品的純度。

現(xiàn)有低溫乙醇分離法中因原料血漿保存不當(dāng)，白蛋白制備過程中反復(fù)溶解和制備組分沉淀引起部分蛋白變性，皆會引起激肽釋放酶原激活劑（PKA）升高。當(dāng)人體輸注PKA含量超標(biāo)的人血白蛋白時，將引起血管舒張、毛細(xì)血管通透性增加、血壓下降等不良反應(yīng)。

現(xiàn)有白蛋白制備工藝中，皆有超濾技術(shù)的應(yīng)用，但主要使用單一溶液進行透析，僅能很好地將乙醇?xì)埩袅靠刂圃谝蠓秶鷥?nèi)，而不能有效將鋁殘留量降到最低，以確保制品在有效期內(nèi)鋁殘留量不超標(biāo)。鋁可能具有引發(fā)低血色素性貧血、老年癡呆癥、骨軟化病和慢性腎功能損害等危險性。2010年版中國藥典收入了人血白蛋白制品鋁殘留量的要求，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與歐洲藥典一致（≤200μg/L）。

發(fā)明內(nèi)容

為了克服上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供了一種人血白蛋白的制備工藝，能提高白蛋白的得率和穩(wěn)定性，保證產(chǎn)品的質(zhì)量。

為解決現(xiàn)有技術(shù)中的問題，本發(fā)明主要從以下幾個方面入手：

1、采用壓濾技術(shù)替代傳統(tǒng)的離心技術(shù)進行固液分離，控制進液壓力最高不超過0.20Mpa。

2、采用Zetaplus深層濾芯過濾結(jié)合延長巴氏滅活時間，降低人血白蛋白制品中的激肽釋放酶原激活劑（PKA）含量。

3、采用超濾技術(shù)，分別使用2種梯度濃度的氯化鈉溶液超濾，提高制品質(zhì)量。

本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是：一種人血白蛋白的制備工藝，采用低溫乙醇分離法，以人血漿為原料，分別進行血漿溶解；組分I制作；組分II+III制作；組分IV制作；組分V制作；組分V精制；超濾；稀配；巴氏滅活；蛋白除菌分裝；制品孵育；成品包裝；其特征在于：?所述組分II+III制作、組分IV制作、組分V制作和組分V精制中采用壓濾技術(shù)替代傳統(tǒng)的離心技術(shù)進行固液分離，控制進液壓力最高不超過0.20Mpa；白蛋白收率>29g/L血漿，純度>98%。?

所述組分V精制中采用Zetaplus深層濾芯過濾，提高對內(nèi)毒素和病毒的脫除能力，吸附制品中帶負(fù)電的凝血因子XIIa，降低人血白蛋白制品中的激肽釋放酶原激活劑（PKA）含量。

所述超濾中采用超濾技術(shù)將組分V純化液濃縮至蛋白含量為15%以上，通過使用2種梯度濃度的氯化鈉溶液超濾，控制制品中的乙醇?xì)埩袅俊?.025%，鋁殘留量<50μg/L。

所述巴氏滅活中巴氏滅活的時間為12個小時，將制品中的PKA含量降到<20IU/ml。

優(yōu)選：

所述組分II+III制作：取組分I?上清液，加pH4.0緩沖液調(diào)節(jié)組分I上清液的pH值為6.80—6.85，控制流速不超過1.0升/分鐘；添加低于－15℃的95％乙醇至乙醇體積比濃度為20％，流速為1.0—1.2升/分鐘，溫度控制在－4—－6℃；加完乙醇后，pH為6.80—7.00；攪拌120分鐘以上后，靜置60分鐘以上，再開啟攪拌，按每升反應(yīng)液加入17—19g硅藻土，進行壓濾，進液壓力最高不超過0.20Mpa，壓濾后得組分Ⅱ+Ⅲ沉淀和組分Ⅱ+Ⅲ上清液；組分Ⅱ+Ⅲ沉淀用于制備免疫球蛋白，組分Ⅱ+Ⅲ上清液進入下一步工序。