[發(fā)明專利]用于制備棉花胚性愈傷組織的培養(yǎng)基、試劑盒及其用途

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310354195.5
• 申請日: 2013-08-14
• 公開（公告）號: CN103387954A
• 公開（公告）日: 2013-11-13
• 發(fā)明（設計）人: 陳全家;曲延英;阿依夏木姑麗·司馬依力;孫國清
• 申請（專利權）人: 新疆農(nóng)業(yè)大學
• 主分類號: C12N5/04
• 分類號: C12N5/04;A01H4/00;A01H5/00
• 代理公司: 北京清亦華知識產(chǎn)權代理事務所(普通合伙) 11201
• 代理人: 李志東

技術領域

本發(fā)明涉及棉花再生體系的建立及棉花轉(zhuǎn)基因技術領域，具體地，本發(fā)明涉及用于制備棉花胚性愈傷組織的培養(yǎng)基、試劑盒及其用途。更具體地，本發(fā)明涉及用于制備棉花胚性愈傷組織的培養(yǎng)基、試劑盒及其用途、制備棉花胚性愈傷組織的方法、制備棉花再生植株的方法以及制備轉(zhuǎn)基因棉花植株的方法。

背景技術

棉花作為世界性重要的經(jīng)濟作物，其遺傳改良工作一直倍受世人關注。然而，棉花再生體系的建立是制約棉花轉(zhuǎn)基因技術能否成功的關鍵。現(xiàn)階段，棉花的組織培養(yǎng)，以及通過體細胞胚胎發(fā)生和植株再生依然比較困難，這主要表現(xiàn)為其對基因型的依賴性強﹑從愈傷組織高效率地轉(zhuǎn)化為胚性愈傷組織過程復雜、周期長﹑胚發(fā)生率很低、再生品種少、畸形苗多、生根困難、基因轉(zhuǎn)化率低和轉(zhuǎn)基因棉花農(nóng)藝性狀的變異等限制因子。上述限制因子使得目前的棉花轉(zhuǎn)基因育種研究的發(fā)展只能依賴轉(zhuǎn)化效率及遺傳穩(wěn)定性均不夠理想的花粉管通道法。因此建立一個高效、優(yōu)良的棉花再生體系是促進轉(zhuǎn)基因技術在棉花育種中廣泛應用的先決條件。

陸地棉種植面積占全球棉花種植面積的90%以上，其以色澤潔白、紡紗品質(zhì)較好而深受紡織企業(yè)及消費者青睞。新疆是我國最大的陸棉種植基地，其棉花產(chǎn)量占到全國棉花產(chǎn)量40%以上。但是，由于水資源短缺乏，氣候極易造成土地的沙漠化、鹽堿化等種種原因，目前新疆棉花的可持續(xù)發(fā)展受到了嚴重的限制。因而，陸地棉再生體系的建立和優(yōu)化，以及遺傳改良意義重大。然而，棉花尤其是陸地棉的再生體系的建立和轉(zhuǎn)基因植株獲得的方法仍有待改進。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明旨在至少解決現(xiàn)有技術中存在的技術問題之一。為此，本發(fā)明的一個目的在于提出一種建立棉花尤其是陸地棉的再生體系的手段。

根據(jù)本發(fā)明的第一方面，本發(fā)明提供了一組用于制備棉花胚性愈傷組織的培養(yǎng)基。根據(jù)本發(fā)明的實施例，該培養(yǎng)基包含：愈傷組織誘導培養(yǎng)基，所述愈傷組織誘導培養(yǎng)基為添加了0.1mg/L?KT、0.05mg/L2,4-D和1.5g/L?gelrite的MSB培養(yǎng)基；胚性愈傷組織誘導培養(yǎng)基，所述胚性愈傷組織誘導培養(yǎng)基為添加了1.9g/L?KNO₃和2.0g/L?gelrite的MSB培養(yǎng)基；以及胚性愈傷組織增殖培養(yǎng)基，所述胚性愈傷組織增殖培養(yǎng)基為添加了1.9g/L?KNO₃、0.1g/L天冬酰胺、0.1g/L谷氨酰胺和1.8g/L?gelrite的MSB培養(yǎng)基。由此，利用本發(fā)明的培養(yǎng)基制備棉花尤其是陸地棉的胚性愈傷組織，能夠顯著提高出愈率和胚性愈傷組織發(fā)生率，減少畸形胚的發(fā)生，且胚性愈傷組織的增殖量非常大。

根據(jù)本發(fā)明的第二方面，本發(fā)明提供了一種用于制備棉花胚性愈傷組織的試劑盒。根據(jù)本發(fā)明的實施例，該試劑盒包含前面所述的一組培養(yǎng)基。根據(jù)本發(fā)明的實施例，利用本發(fā)明的試劑盒制備棉花尤其是陸地棉的胚性愈傷組織，能夠顯著提高出愈率和胚性愈傷組織發(fā)生率，減少畸形胚的發(fā)生，且胚性愈傷組織的增殖量非常大。

根據(jù)本發(fā)明的第三方面，本發(fā)明提供了前面所述根據(jù)本發(fā)明實施例的一組培養(yǎng)基和試劑盒在制備棉花胚性愈傷組織中的用途。如前所述，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，利用本發(fā)明的培養(yǎng)基和試劑盒制備棉花尤其是陸地棉的胚性愈傷組織，能夠顯著提高出愈率和胚性愈傷組織發(fā)生率，減少畸形胚的發(fā)生，且胚性愈傷組織的增殖量非常大。

根據(jù)本發(fā)明的第四方面，本發(fā)明提供了一種制備棉花胚性愈傷組織的方法。根據(jù)本發(fā)明的實施例，該方法包括以下步驟：利用愈傷組織誘導培養(yǎng)基對棉花無菌苗的下胚軸進行培養(yǎng)，以便獲得愈傷組織；利用胚性愈傷組織誘導培養(yǎng)基對所述愈傷組織進行培養(yǎng)，以便獲得初性胚性愈傷組織；以及利用胚性愈傷組織增殖培養(yǎng)基對所述初性胚性愈傷組織進行培養(yǎng)，以便使所述初性胚性愈傷組織增殖，獲得胚性愈傷組織，其中，所述愈傷組織誘導培養(yǎng)基為添加了0.1mg/L?KT、0.05mg/L2,4-D和1.5g/L?gelrite的MSB培養(yǎng)基，所述胚性愈傷組織誘導培養(yǎng)基為添加了1.9g/L?KNO₃和2.0g/L?gelrite的MSB培養(yǎng)基，所述胚性愈傷組織增殖培養(yǎng)基為添加了1.9g/L?KNO₃、0.1g/L天冬酰胺、0.1g/L谷氨酰胺和1.8g/L?gelrite的MSB培養(yǎng)基。由此，利用本發(fā)明的制備棉花胚性愈傷組織的方法制備棉花尤其是陸地棉的胚性愈傷組織，棉花無菌苗的下胚軸出愈率高，胚性愈傷組織發(fā)生率較高，畸形胚減少，胚性愈傷組織增殖量非常大。