[發(fā)明專利]一種烏飯樹組織培養(yǎng)的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310353850.5
• 申請(qǐng)日: 2013-08-14
• 公開（公告）號(hào): CN103404440A
• 公開（公告）日: 2013-11-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李峰;鄧艷;高秋榮;田力;許超
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 江蘇九久環(huán)境科技有限公司
• 主分類號(hào): A01H4/00
• 分類號(hào): A01H4/00
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司 11332
• 代理人: 鞏克棟

1.一種烏飯樹組織培養(yǎng)的方法，其特征在于，包括（1）外植體消毒、（2）誘導(dǎo)培養(yǎng)、（3）增殖培養(yǎng)、（4）生根培養(yǎng)四個(gè)步驟。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的烏飯樹組織培養(yǎng)的方法，其特征在于，所述步驟（1）的具體步驟為：

①取烏飯樹當(dāng)年生帶腋芽的枝條并除去葉片后作為外植體，在洗滌液中浸泡；

優(yōu)選地，所述洗滌液為濃度為0.5wt%～2wt%的洗衣粉的水溶液，優(yōu)選1wt%的洗衣粉的水溶液；

優(yōu)選地，所述浸泡的時(shí)間為5～30min，優(yōu)選10～20min，更優(yōu)選15min；

②刷洗后于流水下沖洗；

優(yōu)選地，所述沖洗的時(shí)間為1～5h，優(yōu)選2～4h，更優(yōu)選3h；

③在超凈工作臺(tái)上，先放入酒精中浸泡，再用無(wú)菌水沖洗；

優(yōu)選地，所述酒精是70wt%的酒精；

優(yōu)選地，所述酒精中浸泡的時(shí)間為20～80s，優(yōu)選30～60s，更優(yōu)選40～50s；

優(yōu)選地，所述無(wú)菌水沖洗的次數(shù)為2～8次，優(yōu)選2-6次，更優(yōu)選3～5次；

④升汞消毒后再用無(wú)菌水沖洗；

優(yōu)選地，所述升汞是0.1wt%的升汞；

優(yōu)選地，所述升汞消毒的時(shí)間是5～20min，優(yōu)選10～15min；

優(yōu)選地，所述無(wú)菌水沖洗的次數(shù)是2～10次，優(yōu)選4～8次，更優(yōu)選5～7次；

⑤吸干表面水分，將莖段剪成帶l個(gè)腋芽的莖段；

優(yōu)選地，所述莖段的長(zhǎng)度是1～2cm。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的烏飯樹組織培養(yǎng)的方法，其特征在于，所述步驟（2）的具體步驟為：

將步驟（1）處理過(guò)的莖段接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基中進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)，待新梢長(zhǎng)出，進(jìn)行下一步驟；

優(yōu)選地，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基是添加了玉米素、吲哚丁酸和赤霉素的WPM培養(yǎng)基；

優(yōu)選地，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基所添加的激素濃度配比為玉米素0.05～4.0mg/L、優(yōu)選0.1～3.0mg/L、更優(yōu)選1.0～2.0mg/L，吲哚丁酸0.01～2.0mg/L、優(yōu)選0.05～1.0mg/L、更優(yōu)選0.1～0.4mg/L，赤霉素0.01～2.0mg/L、優(yōu)選0.05～1.0mg/L、更優(yōu)選0.1～0.2mg/L；

優(yōu)選地，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)的條件為于溫度22～28℃、光照強(qiáng)度1000～2500Lux、光照周期12～16h/d的條件下培養(yǎng)30～45d，更優(yōu)選于溫度25℃、光照強(qiáng)度2000Lux、光照周期12～16h/d的條件下培養(yǎng)30～40d。

4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的烏飯樹組織培養(yǎng)的方法，其特征在于，所述步驟（3）的具體步驟為：

將步驟（2）中得到的新梢剪下轉(zhuǎn)移到增殖培養(yǎng)基中進(jìn)行增殖培養(yǎng)，待新梢長(zhǎng)至4～5cm時(shí)，進(jìn)行下一步驟；

優(yōu)選地，所述增殖培養(yǎng)基是添加了玉米素、吲哚乙酸和赤霉素的WPM培養(yǎng)基；

優(yōu)選地，所述增殖培養(yǎng)基所添加的激素濃度配比為玉米素0.05～4.0mg/L、優(yōu)選0.1～3.0mg/L、更優(yōu)選1.0～2.0mg/L，吲哚乙酸0.01～2.0mg/L、優(yōu)選0.1～1.0mg/L、更優(yōu)選0.2～0.5mg/L，赤霉素0.05～4.0mg/L、優(yōu)選0.1～2.0mg/L、更優(yōu)選0.5～1.5mg/L；

優(yōu)選地，所述增殖培養(yǎng)的條件為于溫度22～28℃、光照強(qiáng)度1000～2500Lux、光照周期12～16h/d的條件下培養(yǎng)40～60d，更優(yōu)選于溫度25℃、光照強(qiáng)度2000Lux、光照周期12～16h/d的條件下培養(yǎng)45～55d。

5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的烏飯樹組織培養(yǎng)的方法，其特征在于，所述步驟（4）的具體步驟為：

將步驟（3）中得到的長(zhǎng)至4～5cm的新梢轉(zhuǎn)移到生根培養(yǎng)基中進(jìn)行生根培養(yǎng)，得到主根長(zhǎng)3～4cm的生根苗；

優(yōu)選地，所述生根培養(yǎng)基是添加了吲哚丁酸和萘乙酸的1/2WPM培養(yǎng)基；

優(yōu)選地，所述生根培養(yǎng)基所添加的激素濃度配比為吲哚丁酸0.01～2.0mg/L、優(yōu)選0.02～1.0mg/L、更優(yōu)選0.03～0.06mg/L，萘乙酸0.01～3.0mg/L、優(yōu)選0.05～2.0mg/L、更優(yōu)選0.1～0.8mg/L；

優(yōu)選地，所述生根培養(yǎng)的條件為于溫度22～28℃、光照強(qiáng)度1000～2500Lux、光照周期12～16h/d的條件下培養(yǎng)15～35d，更優(yōu)選于溫度25℃、光照強(qiáng)度2000Lux、光照周期12～16h/d的條件下培養(yǎng)15～35d。