[發(fā)明專利]一種快速檢測血旺中雞鴨豬血液成分的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310351330.0
• 申請日: 2013-08-13
• 公開（公告）號: CN103525908A
• 公開（公告）日: 2014-01-22
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 黃明;程欣;楊靜;黃繼超;周興虎
• 申請（專利權(quán)）人: 南京吉泰生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;G01N21/64
• 代理公司: 南京蘇高專利商標(biāo)事務(wù)所(普通合伙) 32204
• 代理人: 邱興天

1.一種快速檢測血旺中雞鴨豬血液成分的方法，其特征在于：以血旺為材料，提取DNA，使用TaqMan探針和特異性引物，進(jìn)行熒光定量PCR反應(yīng)；應(yīng)用ABI?7500?Software?SDS1.4對實驗結(jié)果進(jìn)行分析處理，以Ct值小于36的擴(kuò)增作為檢測的陽性結(jié)果；其中，TaqMan探針和特異性引物具體如下：

正向引物1：5’-GGAGCACCTCTATCAGAGAAAGACA-3’，

反向引物1：5’-GTGTGTAGAGCTCAAGATCAATCCC-3’，

TaqMan探針1：FAM-TGGGAACAAGCATGAATGTAAGTGGATGGT-BHQ1；

正向引物2：5’-CGAGAGGCTGCCGTAAAGG-3’，

反向引物2：5’-TGCAAGGAACACGGCTAAGTG-3’，

TaqMan探針2：CY5-ACAGTAGGTCTGACGTGACTCCCCGA-BHQ1；

正向引物3：5’-CAGCTGGCCTGCCGG-3’，

反向引物3：5’-CCCAGTGGAATGTGGTATTCA-3’，

TaqMan探針3：HEX-CTGCCAAGCTCTGCCACTCCTCTG-BHQ1。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速檢測血旺中雞鴨豬血液成分的方法，其特征在于：所述熒光定量PCR反應(yīng)，50μL的反應(yīng)體系組成為：Premix?Ex?Taq?酶25μL，6個特異性引物各1μL，3個TaqMan探針各2μL，Rox?Reference?Dye?Ⅱ?染液1μL，DNA模板5μL，?剩余為ddH₂O。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速檢測血旺中雞鴨豬血液成分的方法，其特征在于：所述熒光定量PCR反應(yīng)，條件為：95℃?30s；95℃?5s，60℃?34s，40個循環(huán)。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速檢測血旺中雞鴨豬血液成分的方法，其特征在于：該方法的DNA模板檢測下限為0.15ng，濃度為0.03ng/μL。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速檢測血旺中雞鴨豬血液成分的方法，其特征在于：該方法的靈敏度達(dá)1%。