[發明專利]熒光微球標記沙丁胺醇多克隆抗體的方法

無效

• 申請號: 201310348226.6
• 申請日: 2013-08-12
• 公開（公告）號: CN103472221A
• 公開（公告）日: 2013-12-25
• 發明（設計）人: 賴衛華;彭濤
• 申請（專利權）人: 南昌大學
• 主分類號: G01N33/533
• 分類號: G01N33/533
• 代理公司: 南昌新天下專利商標代理有限公司 36115
• 代理人: 施秀瑾

1.熒光微球標記沙丁胺醇多克隆抗體的方法，其特征在于：(1)氨基修飾的熒光微球與活潑酯化的生物素在PBS溶液中偶聯反應2?h得到熒光微球-生物素偶聯物，再離心、洗滌除去未結合的生物素；(2)將鏈霉親和素與熒光微球-生物素偶聯物混合輕搖反應2?h后，離心、用PBS溶液洗滌移除未偶聯的鏈霉親和素，得到熒光微球-生物素-鏈霉親和素偶聯物；(3)將生物素化的沙丁胺醇多克隆抗體加入到熒光微球-生物素-鏈霉親和素的偶聯物溶液中輕搖反應1?h后，洗滌、離心以除去未偶聯上的生物素化沙丁胺醇多克隆抗體，即得到熒光微球標記沙丁胺醇多克隆抗體即熒光微球-生物素-鏈霉親和素-生物素化沙丁胺醇多克隆抗體；?所述活潑酯化的生物素為將生物素-PEG₅₀₀₀復合物溶于DMF溶液中，加入二環己基碳亞胺和N-羥基琥珀酰亞胺后室溫攪拌反應24?h，然后離心棄沉淀，得到活潑酯化的生物素；?所述氨基修飾的熒光微球的制備方法：10?mg熒光微球洗凈后超聲溶解于1?mL蒸餾水中，加入20?μL冰乙酸和20?μL(3-三甲氧基硅丙基)-二乙基乙二胺超聲溶解后，磁力攪拌3～4?h，用10?mM?pH5.5的MES緩沖液洗滌并重懸；所述熒光微球粒徑為175?nm。

2.根據權利要求1所述的熒光微球標記沙丁胺醇多克隆抗體的方法，其特征在于：所述生物素化沙丁胺醇多克隆抗體的的制備方法：用1?mL?DMSO溶液溶解生物素N-羥基琥珀酰亞胺酯NHSB配制成濃度為1?mg/mL的溶液，取120?μL加入到1mL濃度為2.3?mg/mL的沙丁胺醇多克隆抗體溶液中，在室溫下持續攪拌，保溫2~4?h；然后加入9.6?μL?1?mol/L的NH₄Cl?溶液在室溫下攪拌10?min，用PBS溶液在4℃下充分透析除去游離的生物素；將透析完后的樣品上1?ml?的分子篩柱，以PBS溶液緩慢洗脫，抗體在1~3?ml?之間洗下，再在收集到的目標產物中加入疊氮鈉及1.0?g/L的BSA溶液，在4?℃下避光保存備用。

3.根據權利要求1所述的熒光微球標記沙丁胺醇多克隆抗體的方法，其特征在于：所述鏈霉親和素與熒光微球-生物素偶聯物混合反應的投料摩爾比為1000:1。

4.根據權利要求1所述的熒光微球標記沙丁胺醇多克隆抗體的方法，其特征在于：所述熒光微球標記生物素化沙丁胺醇多克隆抗體與熒光微球-生物素-鏈霉親和素的偶聯物的投料摩爾比為1:1000。