[發(fā)明專利]一種猴耳環(huán)種子苗莖段組織培養(yǎng)快速繁殖方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310345570.X
• 申請日: 2013-08-09
• 公開（公告）號: CN103430843A
• 公開（公告）日: 2013-12-11
• 發(fā)明（設計）人: 趙小蘭;黃烈健;王渝余
• 申請（專利權）人: 華南農(nóng)業(yè)大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 廣州三環(huán)專利代理有限公司 44202
• 代理人: 王會龍

技術領域

本發(fā)明屬于組織培養(yǎng)快速繁殖技術領域，具體涉及一種猴耳環(huán)種子苗莖段組織培養(yǎng)快速繁殖方法。

背景技術

猴耳環(huán)（Archidendron?clypearia）為含羞草科猴耳環(huán)屬，別名圍涎樹、蛟龍木、落地金錢、雞三樹、尿桶公等，常綠喬木，高達十米。猴耳環(huán)分布于浙江、福建、廣東、海南、四川、廣西及云南，生于荒山坡樹林中、路旁及河旁。猴耳環(huán)既是一種分布在亞熱帶沿海地區(qū)的優(yōu)秀鄉(xiāng)土植物，也是一種重要的園林觀花觀果植物。此外，猴耳環(huán)的莖干、葉片甚至整個植株體內(nèi)含有多種化學成分，其生理活性廣泛，具有細胞毒、抑菌、鎮(zhèn)痛、抗病毒等作用。目前猴耳環(huán)的需求量、市場交易量逐年增加，猴耳環(huán)的利潤額一直處于持續(xù)上漲趨勢，受利益驅(qū)動，很多原生地的猴耳環(huán)都遭遇掠奪性的砍伐，使大量資源迅速減少和消失。國內(nèi)外研究工作者大都對猴耳環(huán)的藥性成分進行研究，對猴耳環(huán)的快速繁殖技術研究甚少。因此，建立猴耳環(huán)的組織培養(yǎng)快速繁殖技術體系，培育性狀一致的植株，對保護猴耳環(huán)野生資源和滿足藥材市場的原材料需求，實現(xiàn)猴耳環(huán)的人工規(guī)模化育苗和生產(chǎn)顯得十分迫切。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明所解決的技術問題在于提供了一種猴耳環(huán)實生苗莖段組織培養(yǎng)快速繁殖方法，通過叢生芽途徑進行猴耳環(huán)組織培養(yǎng)能夠獲得大量遺傳性狀穩(wěn)定的試管苗，保持良好的親本特性，并且具備包括不變性、投入少、產(chǎn)出高、周期短在內(nèi)的諸多優(yōu)勢。

本發(fā)明通過以下技術方案來解決上述技術問題：

一種猴耳環(huán)實生苗莖段組織培養(yǎng)快速繁殖方法，依次包括以下步驟：

1）外植體的采集與表面消毒：選取猴耳環(huán)實生種子苗一二年生幼嫩枝條，采集后將洗凈的枝條分段，并對枝條進行預處理獲取1.5-2cm長、帶1-2個側芽的徑段，而后在超凈工作臺上先用無菌蒸餾水潤洗兩次，再依次通過酒精和升汞溶液進行表面消毒處理，在用升汞溶液進行處理期間不斷的搖晃培養(yǎng)瓶，使莖段與液體充分接觸，之后立即用無菌蒸餾水沖洗5-8次，沖洗好后將莖段置于滅菌待用的碟子中，切除葉柄、莖段兩端受傷部位，將莖段接種到芽誘導培養(yǎng)基中；

2）叢生芽的誘導：采用誘導培養(yǎng)基培養(yǎng)一周之后，新芽長出，30天后新芽長到1-2cm；培養(yǎng)過程中，溫度為25±2℃，光照強度為1500-2000?lx，光照時間為12?小時/天；

3）叢生芽的增殖：將叢生芽切割成2段，每段1-2節(jié)，轉接到叢生芽增殖培養(yǎng)基，培養(yǎng)45-60天，獲得大量叢生芽；培養(yǎng)條件為：溫度為25±2℃，光照強度為1500-2000?lx，光照時間為12?小時/天；

4）繼代培養(yǎng)：采用繼代培養(yǎng)基進行繼代培養(yǎng)，每45天繼代一次；培養(yǎng)條件為：溫度為25±2℃，光照強度為1500-2000?lx，光照時間為12?小時/天；

5）生根培養(yǎng)：繼代苗達到合適數(shù)量后，采用生根培養(yǎng)基進行生根培養(yǎng)，培養(yǎng)30～50天得到生根苗；培養(yǎng)條件為：溫度為25±2℃，光照強度為1500-2000?lx，光照時間為12?小時/天；

6）試管苗移栽：選擇每年3-5月、7-11月為出瓶移栽的季節(jié)，或者提供類似3～5、7-11月份自然條件的生長環(huán)境進行出瓶移栽；移栽前，試管苗放置于具自然光散射的溫室中煉苗7-10天，然后從瓶中取出小苗，清洗根部的培養(yǎng)基，取出后種植于新配制的培養(yǎng)土中，溫室須保持通風，濕度在70～80%，溫度保持在15℃以上至室溫范圍內(nèi)，高于30℃必須用風機、水簾降溫。

優(yōu)選地，所述誘導培養(yǎng)基成為MS基本培養(yǎng)基，未添加任何激素，培養(yǎng)基pH值為5.8-6.0。

優(yōu)選地，所述叢生芽增殖培養(yǎng)基成分中含有MS?+?6-BA（6-芐氨基腺嘌呤）0.50～1.50?mg/L?+IBA（吲哚丁酸）0.00～0.20?mg/L?+NAA（萘乙酸）0.00～0.10mg/L?+GA₃（赤霉素）0.10～1.00?mg/L。

優(yōu)選地，所述繼代培養(yǎng)基成分中含有MS?+6-BA?（6-芐氨基腺嘌呤）0.20～1.50?mg/L?+?NAA（萘乙酸）0.00～0.10?mg/L?+?IBA（吲哚丁酸）0.00～0.20?mg/L?+?GA₃（赤霉素）0.10?～1.50?mg/L。

優(yōu)選地，所述生根培養(yǎng)基成分中含有1/2MS?+?IBA（吲哚丁酸）0.00～1.00?mg/L+?NAA（萘乙酸）0.00～2.00?mg/L。