[發明專利]一種猴耳環種子苗莖段組織培養快速繁殖方法

有效

• 申請號: 201310345570.X
• 申請日: 2013-08-09
• 公開（公告）號: CN103430843A
• 公開（公告）日: 2013-12-11
• 發明（設計）人: 趙小蘭;黃烈健;王渝余
• 申請（專利權）人: 華南農業大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 廣州三環專利代理有限公司 44202
• 代理人: 王會龍

1.一種猴耳環種子苗莖段組織培養快速繁殖方法,?其特征在于該方法依次包括以下步驟：

1）外植體的采集與表面消毒：選取猴耳環實生種子苗一二年生幼嫩枝條，采集后將洗凈的枝條分段，并對枝條進行預處理獲取1.5-2cm長、帶1-2個側芽的徑段，而后在超凈工作臺上先用無菌蒸餾水潤洗兩次，再依次通過酒精和升汞溶液進行表面消毒處理，在用升汞溶液進行處理期間不斷的搖晃培養瓶，使莖段與液體充分接觸，之后立即用無菌蒸餾水沖洗5-8次，沖洗好后將莖段置于滅菌待用的碟子中，切除葉柄、莖段兩端受傷部位，將莖段接種到芽誘導培養基中；

2）叢生芽的誘導：采用誘導培養基培養一周之后，新芽長出，30天后新芽長到1-2cm；培養過程中，溫度為25±2℃，光照強度為1500-2000?lx，光照時間為12?小時/天；

3）叢生芽的增殖：將叢生芽切割成2段，每段1-2節，轉接到叢生芽增殖培養基，培養45-60天，獲得大量叢生芽；培養條件為：溫度為25±2℃，光照強度為1500-2000?lx，光照時間為12?小時/天；

4）繼代培養：采用繼代培養基進行繼代培養，每45天繼代一次；培養條件為：溫度為25±2℃，光照強度為1500-2000?lx，光照時間為12?小時/天；

5）生根培養：繼代苗達到合適數量后，采用生根培養基進行生根培養，培養30～50天得到生根苗；培養條件為：溫度為25±2℃，光照強度為1500-2000?lx，光照時間為12?小時/天；

6）試管苗移栽：選擇每年3-5月、7-11月為出瓶移栽的季節，或者提供類似3～5、7-11月份自然條件的生長環境進行出瓶移栽；移栽前，試管苗放置于具自然光散射的溫室中煉苗7-10天，然后從瓶中取出小苗，清洗根部的培養基，取出后種植于新配制的培養土中，溫室須保持通風，濕度在70～80%，溫度保持在15℃以上至室溫范圍內，高于30℃必須用風機、水簾降溫。

2.如權利要求1所述的猴耳環種子苗莖段組織培養快速繁殖方法，其特征在于：所述誘導培養基為MS基本培養基，未添加任何激素，培養基pH值為5.8-6.0。

3.如權利要求1所述的猴耳環種子苗莖段組織培養快速繁殖方法，其特征在于：所述叢生芽增殖培養基成分中含有MS?+6-芐氨基腺嘌呤0.50～1.50?mg/L?+吲哚丁酸0.00～0.20?mg/L?+萘乙酸0.00～0.10mg/L?+赤霉素0.10～1.00?mg/L。

4.如權利要求1所述的猴耳環種子苗莖段組織培養快速繁殖方法，其特征在于：MS?+6-芐氨基腺嘌呤0.20～1.50?mg/L?+萘乙酸0.00～0.10?mg/L?+吲哚丁酸0.00～0.20?mg/L?+赤霉素0.10?～1.50?mg/L。

5.如權利要求1所述的猴耳環種子苗莖段組織培養快速繁殖方法，其特征在于：所述生根培養基成分中含有1/2MS?+吲哚丁酸0.00～1.00?mg/L+萘乙酸0.00～2.00?mg/L。

6.如權利要求1所述的猴耳環種子苗莖段組織培養快速繁殖方法，其特征在于：所述外植體的采集與表面消毒步驟中，對枝條進行預處理是指用自來水沖洗外植體表面0.5-1?h，剪去葉片，并剪成1.5-2cm長、帶1-2個側芽的徑段，接著用洗潔劑溶液浸泡6min后，再用棉球蘸洗潔劑溶液仔細輕輕清洗腋芽及莖段，再用清水沖洗0.5-1?h，放入干凈容器中待用。

7.如權利要求1所述的猴耳環種子苗莖段組織培養快速繁殖方法，其特征在于：所述外植體的采集與表面消毒步驟中，依次通過酒精和升汞溶液進行處理是指接著轉入75%的酒精中30?s，用無菌蒸餾水沖洗2到3次，然后用0.1%升汞6-?10?min對猴耳環莖段滅菌，期間不斷的搖晃培養瓶。

8.如權利要求1所述的猴耳環種子苗莖段組織培養快速繁殖方法，其特征在于：所述培養土中草炭土、珍珠巖、蛭石的配比3:1:1。