[發明專利]唾液腺組織特異性表達外源蛋白的轉基因載體和轉基因豬及其構建方法

有效

• 申請號: 201310343271.2
• 申請日: 2013-08-07
• 公開（公告）號: CN103695451A
• 公開（公告）日: 2014-04-02
• 發明（設計）人: 張獻偉;吳珍芳;賀曉燕;劉德武;李紫聰
• 申請（專利權）人: 吳珍芳;李紫聰
• 主分類號: C12N15/66
• 分類號: C12N15/66;C12N15/85;A01K67/027
• 代理公司: 北京眾合誠成知識產權代理有限公司 11246
• 代理人: 龔燮英

技術領域

本發明技術屬于基因工程領域，更具體地，本發明涉及一種唾液腺組織特異性表達外源蛋白的轉基因載體和轉基因豬及其構建方法。?

背景技術

β-葡聚糖屬于植物細胞壁中的結構性非淀粉多糖，是由β-1,3和β-1,4糖苷鍵連接而成的D型葡萄糖聚合體，分子量大約在6500KDa以上，分水溶性和非水溶性兩種，其溶解性受結構中糖苷鍵含量和聚合度的影響，廣泛存在于高等植物細胞壁中，在大麥、小麥、黑麥等禾谷類農作物胚乳細胞壁中含量高，大麥中β-葡聚糖含量約4%-10%。β-葡聚糖酶(β-glucanase)可以水解大麥、小麥和黑麥等谷物中的β-葡聚糖，催化裂解β-葡聚糖分子中β-1,3和β-1,4糖苷鍵，降解生成小分子寡糖和葡萄糖。?

木聚糖在植物細胞壁中的含量僅次于纖維素，是半纖維素中含量最豐富的一種，在各種飼料原料特別是麥類、谷物副產品及雜粕中含量較多。木聚糖是由D－木糖主鏈（以β-1,4鍵相連）和L－阿拉伯糖分枝（a-1,2和a-1,3相連）所組成的聚合物，由于它是由阿拉伯糖和木糖兩種單糖聚合而成，因此也稱阿拉伯木聚糖。聚糖本身難以被單胃動物消化吸收，而且阿拉伯木聚糖形成一種胞衣劑，阻礙植物細?胞壁內蛋白質、碳水化合物、脂肪等底物與消化酶結合，同時使消化物的黏稠度提高，阻礙營養物質尤其是脂肪、蛋白質的消化、吸收和利用，降低飼料的轉化效率。聚糖能直接結合消化道中胰蛋白酶、脂肪酶等消化酶，使其活性降低，同時和膽汁鹽、脂類、膽固醇結合，影響脂類在小腸的吸收。阿拉伯木聚糖提高了動物腸道中食穈的黏度，降低了食穈在消化道中的移動速度，促進細菌的大量增殖，使畜禽腹瀉率增加，包括氮和磷在內的排泄物也增加，造成對環境的污染。木聚糖酶是專一降解木聚糖的酶，屬于水解酶類，可將木聚糖分解為木寡糖。木聚糖酶主要由β-1,4-D-內切木聚糖酶、β-1,4-D-外切木糖苷酶和α-L-阿拉伯糖苷酶、α-D-氨基酸醛酸酶等脫支鏈酶構成。?

植酸是植物性飼料中普遍存在的一種抗營養因子，所有植物性飼料都含有1%－5%的植酸鹽，這些鹽的含磷量占飼料總含磷量的60%－80%。由于單胃動物消化道內不含植酸酶，導致其無法或不能很好利用植物性飼料中的磷，植酸磷大部分難以被豬和禽所利用而隨糞便排出體外，污染環境。另外植酸具有很強的絡合能力，可與許多礦質元素和蛋白質絡合形成穩定的復合物，從而降低了這些營養物質的利用率。植酸酶可使植酸磷降解成肌醇和磷酸，從而減少飼料中磷酸氫鈣等無機磷的添加量，另外，研究結果還發現了植酸酶的潛在營養價值：能夠提高飼料中蛋白質和能量的消化率。植酸酶的應用在一定的程度上能緩解我國磷資源的匱乏、減少磷資源的浪費、降低磷排放所帶來的污染。?

葡聚糖酶、木聚糖酶、植酸酶是動物飼料添加劑最常用外源酶?制劑。在禽畜產品養殖中應用飼用酶制劑既能提高飼料的消化率和利用率，提高畜禽的生產性能，又能減少畜禽排泄物中的氮、磷的排泄量，保護水體和土壤免受污染，是一類高效、無毒副作用和環保型的“綠色”飼料添加劑。飼料酶制劑添加對提高動物營養利用，降低成本有一定的積極作用，同時也存在不少問題。目前絕大多開發飼料用酶的性質不夠優良，極少酶能在pH、熱穩定性、抗胃蛋白酶，胰蛋白酶等能力方面聚各優點于一身；飼料酶制劑的添加成本限制酶制劑使用，為了不增加養殖成本，每噸飼料酶制劑成本都不超過100元（楊培龍等，2009）。此外，這些外源消化酶動物自身不能分泌，一直以來都是先利用微生物發酵獲得相應的酶，在人工添加飼料中，添加到飼料中的添加劑容易受飼料制粒、膨化、貯存等因素影響，其活力及其穩定性方面常受各種因素影響，導致酶制劑添加在實際生產中效果不明顯，且需要不斷添加，效果不理想，成本高。?