[發明專利]利用特征多肽制備家蠶絲素蛋白特異抗體的方法

有效

• 申請號: 201310342720.1
• 申請日: 2013-08-07
• 公開（公告）號: CN103509107A
• 公開（公告）日: 2014-01-15
• 發明（設計）人: 鄭秦;吳小鋒;鄭海玲;周旸
• 申請（專利權）人: 浙江大學;中國絲綢博物館
• 主分類號: C07K16/18
• 分類號: C07K16/18;C07K16/06
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司 33200
• 代理人: 陳昱彤

1.?一種利用特征多肽制備家蠶絲素蛋白特異抗體的方法，其特征是，包括以下步驟：

步驟一：利用Fmoc法合成序列為?“CGAGAGSGAGAGS”的多肽，并通過所述多肽的N端的半胱氨酸使該多肽與匙孔血藍蛋白偶聯得到完全抗原；

步驟二：用生理鹽水稀釋所述完全抗原，將稀釋后的完全抗原與完全弗氏佐劑混合，然后再加入鏈霉素和青霉素溶液進行乳化處理得到初次免疫抗原乳化液，使用初次免疫抗原乳化液對兔子進行初次免疫，然后對兔子進行加強免疫，加強免疫使用的是加強免疫抗原乳化液；所述加強免疫抗原乳化液是由所述稀釋后的完全抗原與不完全弗氏佐劑混合，然后再加入鏈霉素和青霉素溶液進行乳化處理得到；當兔子血樣中的抗體的效價達到1/10000時，收集免疫后的兔子的血液，并使血塊充分收縮及抗血清完全析出，然后收集抗血清并離心處理得到上清液。

2.?根據權利要求1或2所述的方法，其特征是：在所述步驟二中，在配制初次免疫抗原乳化液時，稀釋后的完全抗原與完全弗氏佐劑是按體積比1:1進行混合；在配制加強免疫抗原乳化液時，稀釋后的完全抗原與不完全弗氏佐劑是按體積比1:1進行混合。

3.?根據權利要求1或2所述的方法，其特征是：在所述步驟二中，對兔子進行初次免疫的方法是：使用初次免疫抗原乳化液對兔子的后大腿和皮下進行多點注射，每只注射100?ul；

對兔子進行加強免疫的方法是：在初次免疫后的第2、4、6周分別進行一次加強免疫，每次加強免疫是使用加強免疫抗原乳化液對兔子的后大腿和皮下進行多點注射，每只注射100?ul。

4.?根據權利要求1或2所述的方法，其特征是：在所述步驟二中，使血塊充分收縮及抗血清完全析出的方法是：將所收集的血液置室溫下讓其凝固，然后將凝固血液置于37℃溫箱內放置30?min，再置于4℃冰箱過夜。

5.?根據權利要求3所述的方法，其特征是：在所述步驟二中，使血塊充分收縮及抗血清完全析出的方法是：將所收集的血液置室溫下讓其凝固，然后將凝固血液置于37℃溫箱內放置30?min，再置于4℃冰箱過夜。