[發明專利]利用雙熒光素酶報告基因確定關嶺牛MyoDⅠ基因核心啟動子的方法

有效

• 申請號: 201310341205.1
• 申請日: 2013-08-07
• 公開（公告）號: CN103571941A
• 公開（公告）日: 2014-02-12
• 發明（設計）人: 許厚強;李飛;陳偉;陳祥;趙佳福
• 申請（專利權）人: 貴州大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/66
• 代理公司: 貴陽中新專利商標事務所 52100
• 代理人: 李亮;程新敏

1.一種利用雙熒光素酶報告基因確定關嶺牛MyoDⅠ基因核心啟動子的方法，其特征在于：包括以下步驟：

步驟1）、構建含關嶺牛MyoDⅠ基因啟動子全長片段和亞克隆片段的重組載體；

步驟2）、對骨骼肌生長相關的細胞進行培養和鋪板；

步驟3）、配制啟動子重組子/脂質體的混合物，對步驟2）獲得的細胞進行轉染；

步驟4）、通過雙熒光素酶報告基因對步驟3）獲得的轉染細胞進行雙熒光素酶活性檢測。

2.根據權利要求1所述的利用雙熒光素酶報告基因確定關嶺牛MyoDⅠ基因核心啟動子的方法，其特征在于：步驟4）中所述的雙熒光素酶報告基因為螢火蟲熒光素酶基因。

3.根據權利要求1所述的利用雙熒光素酶報告基因確定關嶺牛MyoDⅠ基因核心啟動子的方法，其特征在于：所述的雙熒光素酶活性檢測所采用的工作液是通過promega?試劑盒配制獲得。

4.根據權利要求1所述的利用雙熒光素酶報告基因確定關嶺牛MyoDⅠ基因核心啟動子的方法，其特征在于：步驟1）中所采用的引物為8對，引物P0的上游引物的序列為：5′-ACCTCCCGACATCATACATT-3′，引物P0的下游引物的序列為：5′-GAAACCCAGCCGCATCTA-3′；引物P1的上游引物的序列為：5′-?ACCTCCCGACATCATACATT-3′，引物P1的下游引物的序列為：5′-?GGTTTGGGTTGCTAGACG-3′；引物P2的上游引物的序列為：5′-?GTGGAGTTCCGCTTGTTG-3′，引物P2的下游引物的序列為：5′-?GGTTTGGGTTGCTAGACG-3′；引物P3的上游引物的序列為：5′-?GATATGGAGCTGCTGTCGC-3′，引物P3的下游引物的序列為：5′-?AGCCGCTGGTTTGGGTTGC-3′；引物P4的上游引物的序列為：5′-?GTGGAGTTCCGCTTGTTG-3′，引物P4的下游引物的序列為：5′-?CTCCCCACCCCTACTTTC-3′；引物P5的上游引物的序列為：5′-?CTCCCTGATTCGGTAGATC-3′，引物P5的下游引物的序列為：5′-?CTCCCCACCCCTACTTTC-3′；引物P6的上游引物的序列為：5′-?CTCCCTGCTCTGTTCCTATT-3′，引物P6的下游引物的序列為：5′-?AAACTTGCTGCTGTTCTGG-3′；引物P7的上游引物的序列為：5′-?TTAGGCTACTACGGGATAAA-3′，引物P7的下游引物的序列為：5′-?CTCCCCACCCCTACTTTC?-3′。