[發明專利]一種檢測生長素類農藥或其結構類似物殘留的方法

有效

• 申請號: 201310340704.9
• 申請日: 2013-08-07
• 公開（公告）號: CN103468795A
• 公開（公告）日: 2013-12-25
• 發明（設計）人: 李崗;王強;蔡磊明;吳聲敢;趙學平;吳長興
• 申請（專利權）人: 浙江省農業科學院
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 浙江杭州金通專利事務所有限公司 33100
• 代理人: 向慶寧

1.一種檢測生長素類農藥或其結構類似物殘留的方法，其特征在于，該方法包括：

（1）、摘取苗期大豆葉片，立即把葉柄浸入液體樣本中1小時，從液體樣本中取出大豆葉片用于總RNA的提取；同時取清水處理大豆葉片作對照；

（2）、以SKIP16基因為內參，以GH3.6為標志基因，檢測GH3基因在步驟1處理后的大豆體內的相對表達量；

如果相對表達量大于5以上，則說明書液體樣本中含有生長素類農藥或與生長素農藥類似結構的農藥殘留。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的內參SKIP16基因的序列為在基因庫中編號為CD397253所示的序列；GH3基因的序列為在基因庫中編號為XM_003543231.1所示的序列；內參基因的引物序列為GAGCCCAAGACATTGCGAGAG和CGGAAGCGGAAGAACTGAACC；GH3基因的引物序列為：?CTCCACCAAAGACTATGTTCTTGAAGA和CTCTTGAAGGTGTCAGGGTCGA。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，相對表達量為10-15。

4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，相對表達量為10或15。

5.根據權利要求1-4之一所述的方法，其特征在于，所述的生長素農藥為苯氧羧酸類，二氯喹啉酸或多菌靈中的一種或幾種。

6.根據權利要求5之一所述的方法，其特征在于，所述的生長素農藥為二氯喹啉酸。

7.根據權利要求1-6之一所述的方法，其特征在于，相對表達量的檢測采用Real-Time?PCR，其中，內參基因的反應體系如下：總體積為25ul，其中ddH₂O:?10.5ul；SYBR?Premix?ex?TaqTM?(2×):?12.5ul；PCR-F?(10uM):?0.5?ul；PCR-R?(10uM):?0.5?ul；模板cDNA：1.0?ul；標志基因的反應體系如下：總體積為25ul，其中ddH₂O:?10.5ul；SYBR?Premix?ex?TaqTM?(2×):?12.5ul；PCR-F1?(10uM):?0.5?ul；PCR-R1?(10uM):?0.5?ul；模板cDNA：1.0?ul；反應條件：95℃，1min；45個循環：95℃，10sec；62℃?25sec,?在55℃?to?95℃內收集熒光熔點曲線進行分析。

8.根據權利要求1-7之一所述的方法，其特征在于，所述的液體樣本來自植物組織的提取液，或者環境土壤、水。

9.一種把GH3基因作為檢測生長素類農藥或其結構類似物殘留的用途。

10.根據權利要求9所述的用途，其中，檢測GH3基因的表達量來檢測液體樣本中是否含有生長素類農藥或其結構類似物殘留，其中檢測方法如下：

（1）、摘取苗期大豆葉片，立即把葉柄浸入液體樣本中1小時，從液體樣本中取出大豆葉片用于總RNA的提取；同時取清水處理大豆葉片作對照；

（2）、以SKIP16基因為內參，以GH3.6為標志基因，檢測GH3基因在步驟1處理過的大豆體內的相對表達量；如果相對表達量大于5以上，則說明書液體樣本中含有生長素類農藥或與生長素農藥類似結構的農藥殘留。