[發明專利]抗體表達載體的構建方法

在審

• 申請號: 201310340307.1
• 申請日: 2013-08-07
• 公開（公告）號: CN104342449A
• 公開（公告）日: 2015-02-11
• 發明（設計）人: 吳晨衍
• 申請（專利權）人: 太倉美諾恒康生物技術有限公司
• 主分類號: C12N15/63
• 分類號: C12N15/63;C12N15/66
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種抗體表達載體的構建方法，在將表達載體p3MH改造為PAL過程中，使用兩種DNA操作，其特征在于，包括以下步驟：

(1)表達載體的構建；

(2)噬菌體的制備和滴定；

(3)抗體基因的細胞內重組；

(4)酶聯免疫吸附劑測定。

2.根據權利要求1所述的抗體表達載體的構建方法，其特征在于，所述表達載體p3MH為本實驗室在pCOMB3H的基礎上改造而成。

3.根據權利要求1所述的抗體表達載體的構建方法，其特征在于，所述步驟(1)具體包括：在載體中插入人工合成的寡核苷酸和通過PCR介導的定位突變改造載體中的特定序列。

4.根據權利要求1所述的抗體表達載體的構建方法，其特征在于，所述步驟(2)具體包括：挑選含有適當載體的單集落XL1-BLUE菌，接種到含氨芐青霉素和葡萄糖的培養基中。

5.根據權利要求1所述的抗體表達載體的構建方法，其特征在于，所述步驟(3)具體包括：挑選單集落BS1365菌，在含有卡那霉素和葡萄糖的培養液中生長至對數增長期，通過稀釋鋪盤計數每毫升所含細菌數，將兩種噬菌體混合。

6.根據權利要求1所述的抗體表達載體的構建方法，其特征在于，所述步驟(4)具體包括：將HbsAg用碳酸鹽溶液稀釋，擱置12小時，假如待測噬菌體樣本，在37度下孵育一小時，加OPD底物顯色，讀取A490值。

7.根據權利要求2所述的抗體表達載體的構建方法，其特征在于，PCR介導的定位突變的操作步驟為：設計合成含有預期突變序列和適當限制性內切酶消化后，與相同內切酶消化的載體常規連接，連接物轉化感受態細菌，鋪盤選單集落提取質粒，用內切酶分析鑒定正確。