[發明專利]改進無固定點靶物質的青霉素類抗生素適配體及其應用

有效

• 申請號: 201310338219.8
• 申請日: 2013-08-05
• 公開（公告）號: CN103387991A
• 公開（公告）日: 2013-11-13
• 發明（設計）人: 周培;賀蘭;智文婷;詹深山;羅艷芳;劉樂
• 申請（專利權）人: 上海交通大學
• 主分類號: C12N15/115
• 分類號: C12N15/115;G01N21/31
• 代理公司: 上海交達專利事務所 31201
• 代理人: 王毓理;王錫麟

1.一種青霉素類抗生素適配體，其特征在于，該青霉素類抗生素適配體長度為68bp，序列如Seq?ID?No.1所示，該適配體的二級結構為莖環結構，其分子結構如下：

2.根據權利要求1所述的適配體的應用，其特征在于，用于開發青霉素類適配體傳感器，該傳感器由青霉素類抗生素適配體、陽離子電解質和納米金溶液組成；在520nm和650nm處的光吸收比值與6-APA濃度成正比。

3.根據權利要求2所述的適配體傳感器的制備方法，其特征在于，所述傳感器通過將6-APA溶液依次與青霉素類抗生素適配體溶液、納米金溶液以及陽離子電解質混合制成；

所述的6-APA溶液的濃度范圍為：0.2-2μM；

所述的青霉素類抗生素適配體溶液的濃度范圍為：1-20nM；

所述的納米金溶液是指：將3.5mL1.0wt%的次氯酸加入至10.5mL1.0%的檸檬酸三鈉溶液中，加熱攪拌30分鐘后，不加熱攪拌至溶液顏色由灰色變為亮紅色，置成納米粒徑為15nm的納米金溶液，保存至4℃冰箱；

所述的陽離子電解質的濃度范圍為：0.084-0.158nM；

所述的陽離子電解質是指：聚二烯丙二甲基胺。

4.根據權利要求3所述的方法，其特征是，所述的青霉素類抗生素適配體溶液的濃度為6nM；所述的陽離子電解質的濃度為0.1121nM。

5.根據權利要求3所述的青霉素類適配體傳感器的檢測方法，其特征在于，所述方法通過以下方式實現6-APA濃度檢測：

第一步、制備已知濃度的6-APA檢測體系：取9支包含青霉素類抗生素的核酸適配體與納米金混合液的PE管，在25℃條件下孵育15分鐘；然后分別加入10μL不同濃度6-APA標準液，使得整個檢測體系中的6-APA含量維持在0.01–5μM之間，充分混勻后再將PE管置于25℃條件下孵育15min；

第二步、另取1支包含青霉素類抗生素適配體和緩沖溶液的PE管，加入10μL超純水，制成空白對照體系溶液；

第三步、向10支PE管中分別加入100μL納米金溶液，充分混勻后再將PE管置于25℃條件下孵育15min；然后向上述孵育完的10支PE管中分別加入0.1121nM的PDDA，充分混勻后再將PE置于25℃條件下孵育5min。

第四步、通過擬合酶標儀測得第三步步驟后各溶液的650nm和520nm處吸光值的比值之差，并制作得到光吸收差值標準曲線用于檢測6-APA濃度。

6.根據權利要求5所述的方法，其特征是，所述的空白對照體系溶液的組分為：將6nM青霉素類抗生素適配體在超純水中孵育15分鐘后，加入100μL納米金，再加入濃度為0.1121nM的PDDA反應5分鐘。

7.根據權利要求5所述的方法，其特征是，所述的光吸收差值標準曲線是指：將不同濃度6-APA作為橫坐標，以檢測體系以及空白對照液用酶標儀測定得到的650nm和520nm處光吸收值的比值之差為縱坐標繪制標準曲線，得到公式y=7843.9x-3.0572，R²=0.996。

8.根據權利要求5所述的方法，其特征是，所述的6-APA濃度通過以下方式實現檢測：取6nM青霉素類抗生素的核酸適配體，加入200μL納米金溶液，孵育15分鐘后，加入待測樣品反應15分鐘，再加入0.1121nM?PDDA反應5分鐘后，酶標儀檢測溶液650nm和520nm處吸光值的比值之差。代入標準曲線計算公式，換算出待測樣品中6-APA濃度。