[發明專利]一種檢測轉基因植物中CaMV35S啟動子的方法及試劑盒

有效

• 申請號: 201310334113.0
• 申請日: 2013-08-02
• 公開（公告）號: CN103397093A
• 公開（公告）日: 2013-11-20
• 發明（設計）人: 黃新;翟聰聰
• 申請（專利權）人: 中國檢驗檢疫科學研究院
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

1.一種檢測含有CaMV35S啟動子的轉基因植物的引物組合物，所述引物組合物中各引物分別具有下述核苷酸序列之一：

1)序列表中SEQ?ID№.1-SEQ?ID№.5所示的核苷酸序列；

2）在高嚴謹條件下可與序列表中SEQ?ID№.1-SEQ?ID№.5所限定的DNA序列雜交的核苷酸序列；

3）與1）或2）限定的DNA序列具有90％以上同源性，且可特異性檢測轉基因植物的核苷酸序列；具體的，所述同源性為95%以上；再具體的為96%以上；再具體的為97%以上；再具體的為98%以上；再具體的為99%以上。

2.根據權利要求1所述的引物組合物，其特征在于：所述具有序列表中SEQ?ID№.4和SEQ?ID№.5所示的核苷酸序列的引物，在其5’端進行了抗體標記修飾。

3.一種檢測含有CaMV35S啟動子的轉基因植物的方法，所述方法為以權力要求1或2所述的引物組合物為引物，以待測植物的基因組DNA或cDNA為模板，進行交叉引物擴增；若能擴增出產物，則所述待測植物中候選含有CaMV35S啟動子；若不能擴增出產物，則所述待測植物中候選不含有CaMV35S啟動子。

4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于：所述交叉引物擴增的反應體系包括：權力要求1或2所述的引物組合物、模板DNA或cDNA、交叉引物擴增專用酶、交叉引物擴增專用緩沖液、dNTPs混合物、甜菜堿溶液、MgSO₄和H₂O。

5.根據權利要求3或4所述的方法，其特征在于：除模板DNA或cDNA以外，所述交叉引物擴增的反應體系具體為：每10μL反應體系中含有10×ThermoPol緩沖液1.0μL、10mM?dNTPs混合物0.8μL、5M甜菜堿溶液1.0μL、1.0M?MgSO₄水溶液0.12μL、20μM具有序列表中SEQ?ID№.1所示核酸序列的引物0.2μL、20μM具有序列表中SEQ?ID№.2所示核酸序列的引物0.2μL、20μM具有序列表中SEQ?ID№.3所示核酸序列的引物0.5μL，20μM具有序列表中SEQ?ID№.4所示核酸序列的引物或在其5’端進行了FITC標記修飾的引物0.3μL，20μM具有序列表中SEQ?ID№.5所示核酸序列的引物或在其5’端進行了BIOTIN標記修飾的引物0.3μL，Bst?DNA聚合酶大片段6.4U,加入模板DNA或cDNA后用H₂O補足至10μL。

6.根據權利要求3-5任一所述的方法，其特征在于：所述交叉引物擴增的反應條件為95℃5min；62℃，50min。

7.一種檢測含有CaMV35S啟動子的轉基因植物的試劑盒，所述試劑盒包括權力要求1或2所述的引物組合物。

8.一種檢測含有CaMV35S啟動子的轉基因植物的PCR試劑，所述PCR試劑為每10μL?PCR試劑中含有10×ThermoPol緩沖液1.0μL、10mM?dNTPs混合物0.8μL、5M甜菜堿溶液1.0μL、1.0M?MgSO₄水溶液0.12μL、20μM具有序列表中SEQ?ID№.1所示核酸序列的引物0.2μL、20μM具有序列表中SEQ?ID№.2所示核酸序列的引物0.2μL、20μM具有序列表中SEQ?ID№.3所示核酸序列的引物0.5μL，20μM具有序列表中SEQ?ID№.4所示核酸序列的引物或在其5’端進行了FITC標記修飾的引物0.3μL，20μM具有序列表中SEQ?ID№.5所示核酸序列的引物或在其5’端進行了BIOTIN標記修飾的引物0.3μL，Bst?DNA聚合酶大片段6.4U，加水補足至10μL。

9.權利要求1或2所述的引物組合物、權利要求7所述的試劑盒或權利要求8所述的PCR試劑在檢測含有CaMV35S啟動子的轉基因植物中的應用。

10.權利要求1或2所述的引物組合物在制備檢測含有CaMV35S啟動子的轉基因植物試劑盒或PCR試劑中的應用。