[發(fā)明專(zhuān)利]用于葉籽銀杏MSAP分析的DNA提取方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310334067.4
• 申請(qǐng)日: 2013-08-02
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103421765A
• 公開(kāi)（公告）日: 2013-12-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 邢世巖;王聰聰;付兆軍
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 山東農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C12N15/10
• 分類(lèi)號(hào): C12N15/10;C12Q1/68
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

1.一種用于葉籽銀杏MSAP分析的DNA提取方法，其特征在于該方法包括下述步驟：

（1）研缽、研錘、藥匙、2ml及1.5ml離心管等高壓滅菌，液氮準(zhǔn)備，2%CTAB、TE等試劑的配制，CTAB在65℃水浴鍋中預(yù)熱10min以上；

（2）稱(chēng)新鮮嫩葉.015g-0.20g，迅速倒入預(yù)冷的研缽中，倒入液氮迅速研磨，多次研磨至粉末狀，立即轉(zhuǎn)入裝有700μL預(yù)熱CTAB的2mL離心管中，加入35μLβ-巰基乙醇和20％PVP140μL，充分混勻；

（3）65℃溫浴30min以上，中間顛倒離心管搖動(dòng)3-5次，取出后冷卻至室溫；

（4）加入等體積的氯仿異戊醇24：1V/V，輕輕顛倒混勻，室溫12000rpm離心10min；

（5）吸取上清轉(zhuǎn)入2mL的離心管中，加入2倍體積的無(wú)水乙醇，然后加入20μL3mol.L^-1NaAc，一般離心管內(nèi)會(huì)有棉團(tuán)狀DNA出現(xiàn)，-20℃冰箱中放置30min以上；

（6）3000rpm離心6min，棄上清，用70％乙醇洗滌2次，放置30min左右自然風(fēng)干；

（7）加600μL?TE充分溶解DNA；

（8）加入等體積的酚：氯仿：異戊醇25：24：1V/V，顛倒混勻，12000rpm離心10min；

（9）吸取上清，加入等體積的氯仿：異戊醇，輕輕顛倒混勻，12000rpm離心10min；

（10）吸取上清轉(zhuǎn)入2mL的離心管中，然后加入30μL3mol/L?NaAc，一般離心管內(nèi)會(huì)有棉團(tuán)狀DNA出現(xiàn)，-20℃冰箱中放置30min以上；

（11）3000rpm離心6min，棄上清，用70％乙醇洗滌2次，再用無(wú)水乙醇洗滌1次，自然風(fēng)干；

（12）加60μL?TE充分溶解DNA；

（13）待溶解后，加入4μL5mg/mL?RNA酶，37℃水浴30min，冷卻至室溫，分裝后4℃保存?zhèn)溆茫?20℃長(zhǎng)期保存。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于葉籽銀杏MSAP分析的DNA提取方法，其特征在于，所述步驟2）將葉籽銀杏多次研磨至粉末狀，立即轉(zhuǎn)入裝有700μL預(yù)熱CTAB的2mL離心管中，加入35μLβ-巰基乙醇和20％PVP140μL，充分混勻。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于葉籽銀杏MSAP分析的DNA提取方法，其特征在于，所述步驟8）加入等體積的酚：氯仿：異戊醇25：24：1V/V，顛倒混勻，12000rpm離心10min。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于葉籽銀杏MSAP分析的DNA提取方法，其特征在于，所述步驟9）吸取上清，加入等體積的氯仿：異戊醇，輕輕顛倒混勻，12000rpm離心10min。