[發明專利]水產養殖環境水體中孔雀石綠及其代謝物含量檢測方法

有效

• 申請號: 201310333128.5
• 申請日: 2013-08-01
• 公開（公告）號: CN103389349A
• 公開（公告）日: 2013-11-13
• 發明（設計）人: 梅光明;郭遠明;張小軍;陳雪昌;龍舉;尤炬炬
• 申請（專利權）人: 浙江省海洋水產研究所
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司 33200
• 代理人: 杜軍

技術領域

本發明屬于環境質量安全檢測技術領域，涉及一種水產養殖環境水體中孔雀石綠及其代謝物含量檢測方法。

背景技術

孔雀石綠屬于一種工業染料，在水產養殖中經常用來治療水霉病、腮霉病以及環境的消毒等。研究表明孔雀石綠及其代謝產物隱色孔雀石綠在動物體內消除緩慢，殘留時間長，且具有致癌、致畸和致突變作用，歐美很多國家以及我國農業部公告第235號文件都將孔雀石綠列為禁止使用藥物，規定在動物源性食品中不得檢出。目前水產養殖中違規使用孔雀石綠的現象已得到各級政府部門的有效控制，但仍有少數漁民在使用孔雀石綠，再加上曾經孔雀石綠被廣泛應用，對部分水產養殖環境已造成了污染，導致部分養殖環境水體中會殘存孔雀石綠類藥物，為后續的水產養殖帶來安全隱患。此外，在部分水產品的市場流通環節中也會因為魚體保活需要，一些非法分子在暫養水體中加入孔雀石綠。實際檢測工作中也經常發現未使用孔雀石綠類藥物進行疾病治療的水產品也能檢出孔雀石綠及其代謝物的存在。以上情況的存在一定程度上給水產品質量安全問題溯源工作帶來麻煩。因此監測水產養殖環境水體中孔雀石綠及其代謝物含量水平對了解養殖環境安全狀況、排查水產品中孔雀石綠污染來源和水產品質量安全監管工作具有積極意義。目前針對水產養殖環境水體中的痕量孔雀石綠及其代謝物檢測方法的研究較少。如何通過有效地樣品前處理技術和儀器分析技術，建立一種樣品富集程度高、回收率高、重現性好和精確度高的水產養殖環境水體中孔雀石綠類殘留檢測方法成為研究的關鍵。

碳納米管（Carbon?nanotubes,?CNTS）作為新型的功能性材料，在物理、化學和生物等領域得到了廣泛應用。CNTS具有很強的吸附能力，可通過π—π作用力、范德華力和疏水相互作用等非共價作用力與目標物分子結合，具有高比表面積、良好的化學、機械穩定性和熱穩定性等優點，可作為優良的氣相色譜、毛細管電泳及高效液相色譜柱填充材料，也可作為吸附材料用于富集有機污染物、金屬離子和生物大分子。由于CNTS材料具有的良好性能和低廉的價格優勢，目前已有文獻報道CNTS中的多壁碳納米管（MWCNTS）用于水體中有機磷、有機氯、農藥等樣品的前處理和凈化中。將多壁碳納米管材料更多地用于獸藥殘留檢測工作中對于拓展獸藥殘留前處理技術也具有積極的意義。孔雀石綠的檢測技術有液相色譜和液相色譜-質譜聯用。通過丙磺酸陽離子交換固相萃取柱或氧化鋁固相萃取柱凈化后，實現液相色譜—熒光檢測、液相色譜—紫外檢測和液相色譜—質譜聯用分析檢測。液相色譜法前處理復雜、耗時、檢出限高和不利于準確定量和定性分析。水產養殖環境水體基質成分復雜，且污染物含量較低，若樣品前處理過程中雜質去除不好，直接會干擾儀器的測定結果，因此將高效且成本低廉的碳納米材料用于樣品前處理技術是本發明的目的。

發明內容

本發明的目的是克服現有分析方法的不足，能找到一種快速、準確且成本低廉的養殖環境水體中孔雀石綠及其代謝物的測定方法，以實現水產養殖環境水體中孔雀石綠及其代謝物的定量及定性分析測定。

本發明方法包括以下步驟：⑴樣品預處理、⑵固相萃取富集凈化、⑶液相色譜—質譜檢測，各步驟的操作方法如下：

⑴樣品預處理：準確移取經過濾后的水樣20～50mL，加入10ng氘代孔雀石綠和10ng氘代隱色孔雀石綠，加入色譜純甲酸使其體積分數為0.04～0.10%。

⑵固相萃取富集凈化：在3mL聚乙烯固相萃取小柱（SPE專用空柱）底部先放置一層孔徑20μm石英砂濾芯篩板，加入20～60mg多壁碳納米管材料（直徑40～60nm，長度5～15μm，純度＞95%，灰分≤2%，比表面積為40～300m²/g），上面再放置一層20μm濾芯篩板，通過調節上層濾芯篩板向下壓緊程度來控制多壁碳納米管填料厚度在0.5～0.6cm；制作完成的多壁碳納米管固相萃取柱先用5mL甲醇和5mL純水潤洗活化，然后將預處理后的水樣全部轉移至固相萃取柱中，控制流速在1.0mL/min；再向固相萃取柱中加入5mL純水淋洗，棄去以上全部流出液；最后向固相萃取柱中加入5%甲酸乙腈4～6mL進行洗脫，收集洗脫液于10mL試管中。