[發明專利]水產養殖環境水體中孔雀石綠及其代謝物含量檢測方法

有效

• 申請號: 201310333128.5
• 申請日: 2013-08-01
• 公開（公告）號: CN103389349A
• 公開（公告）日: 2013-11-13
• 發明（設計）人: 梅光明;郭遠明;張小軍;陳雪昌;龍舉;尤炬炬
• 申請（專利權）人: 浙江省海洋水產研究所
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司 33200
• 代理人: 杜軍

1.?水產養殖環境水體中孔雀石綠及其代謝物含量檢測方法，其特征在于該方法包括樣品預處理、固相萃取富集凈化和液相色譜—質譜檢測這三個步驟，其中：

所述的樣品預處理，按下面步驟操作：準確移取經過濾后的水樣20～50mL，加入10ng氘代孔雀石綠和10ng氘代隱色孔雀石綠，加入色譜純甲酸使其體積分數為0.04～0.10%；

所述的固相萃取富集凈化，按下面步驟操作：在3mL聚乙烯固相萃取小柱底部先放置一層孔徑20μm石英砂濾芯篩板，加入20～60mg多壁碳納米管材料，上面再放置一層20μm濾芯篩板，通過調節上層濾芯篩板向下壓緊程度來控制多壁碳納米管填料厚度在0.5～0.6cm；制作完成的多壁碳納米管固相萃取柱先用5mL甲醇和5mL純水潤洗活化，然后將預處理后的水樣全部轉移至固相萃取柱中，控制流速在1.0mL/min；再向固相萃取柱中加入5mL純水淋洗，棄去以上全部流出液；最后向固相萃取柱中加入5%甲酸乙腈4～6mL進行洗脫，收集洗脫液于10mL試管中；

所述的液相色譜—質譜檢測，按下面步驟操作：洗脫液經45～55℃下氮氣吹干后，用2mL初始組成流動相充分溶解；取1mL樣液，經0.22μm有機相微孔濾膜過濾到樣品小瓶中，在已設定的液相色譜—質譜條件下進行檢測，進行定性定量分析；

色譜條件：C₁₈色譜柱柱溫40℃，進樣量10μL，流動相組成為用甲酸調pH至4.5的5mmol/L乙酸銨緩沖溶液和乙腈，流速0.3?mL/min；

梯度洗脫條件：0～3.0min內乙酸銨緩沖溶液體積濃度由50%線性降至5%；3.0～5.0min內乙酸銨緩沖溶液體積濃度由5%線性升至50%；

質譜條件：電噴霧正離子模式，毛細管電壓3.50kv，離子源溫度120℃，脫溶劑氣溫度380℃，脫溶劑氣流量600?L/h，錐孔氣流量50?L/h，多反應監測掃描模式；孔雀石綠定量離子對329.3/313.2,?定性離子對329.3/208.1，隱色孔雀石綠定量離子對331.2/316.2,?定性離子對331.2/239.2；繪制標準工作曲線，以內標法定量計算孔雀石綠和隱色孔雀石綠含量。

2.根據權利要求1所述的一種水產養殖環境水體中孔雀石綠含量的檢測方法，其特征在于：所述的多壁碳納米管材料直徑為40～60nm，長度為5～15μm，純度＞95%，灰分≤2%，比表面積為40～300m²/g。