[發(fā)明專利]奧沙利鉑藥物組合物及應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310332311.3
• 申請(qǐng)日: 2013-08-01
• 公開（公告）號(hào): CN103520723A
• 公開（公告）日: 2014-01-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李華光;張亞杰
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海銳賽生物技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): A61K45/00
• 分類號(hào): A61K45/00;A61K31/7048;A61K31/704;A61K31/282;A61P35/00
• 代理公司: 上海三方專利事務(wù)所 31127
• 代理人: 吳干權(quán)

[技術(shù)領(lǐng)域]

本發(fā)明涉及奧沙利鉑類結(jié)腸癌治療藥物和應(yīng)用，特別涉及CCDC88A和TOP2B抑制劑和奧沙利鉑的藥物組合物及應(yīng)用。?

[背景技術(shù)]

奧沙利鉑作為第三代鉑類藥物，廣泛用于結(jié)直腸癌輔助治療的一線方案。奧沙利鉑發(fā)揮細(xì)胞毒性作用的機(jī)制是在細(xì)胞內(nèi)通過(guò)代謝產(chǎn)物與DNA交聯(lián)形成DNA復(fù)合物，從而終止腫瘤細(xì)胞的復(fù)制、導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。研究表明只有40%患者從中獲益，但是仍然有一部分患者治療失敗。其主要的原因是對(duì)于奧沙利鉑化療藥物原始或獲得性的耐藥性。這種耐藥性的產(chǎn)生包含化療藥物的運(yùn)輸、DNA修復(fù)、DNA損傷耐受和凋亡等多個(gè)因素的參與。如何提高奧沙利鉑為主的結(jié)直腸癌化療敏感性成為當(dāng)前臨床研究和基礎(chǔ)研究的熱點(diǎn)問(wèn)題。?

CCDC88A（Gene?ID:?55704），屬激酶調(diào)節(jié)蛋白，它的C端含有GEF（Guanine?nucleotide?Exchange?Factor）結(jié)構(gòu)域，能夠與G蛋白I?型α亞基（Giα）結(jié)合，釋放Gβγ亞基，從而活化細(xì)胞內(nèi)激酶，進(jìn)而調(diào)控細(xì)胞內(nèi)信號(hào)通路，在腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移過(guò)程中起重要作用。有研究表明CCDC88A在進(jìn)展期結(jié)直腸癌中的表達(dá)有明顯升高并且影響結(jié)直腸癌患者預(yù)后。目前發(fā)現(xiàn)CCDC88A主要通過(guò)調(diào)控EGFR和PI3K信號(hào)通路調(diào)控腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。CCDC88A在細(xì)胞內(nèi)通過(guò)GEF結(jié)構(gòu)域結(jié)合Giα，同時(shí)其C端與EGFR結(jié)合，形成Giα-GIV-EGFR復(fù)合物，EGFR發(fā)生磷酸化，進(jìn)而導(dǎo)致下游PI3K，AKT和PLCγ磷酸化，促進(jìn)細(xì)胞遷移；當(dāng)CCDC88A的1685位氨基酸發(fā)生突變（F1685A）后，不能和G蛋白?結(jié)合，EGFR磷酸化水平下降，但是SRC和ERK磷酸化水平升高，也可以促進(jìn)細(xì)胞分裂和增殖。EGFR、PI3K和AKT的磷酸化水平除了與腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移有關(guān)之外，還與腫瘤細(xì)胞對(duì)藥物的抗性有關(guān)，在鉑類耐藥的腫瘤細(xì)胞中均發(fā)現(xiàn)EGFR和PI3K磷酸化水平比非耐藥細(xì)胞要高。既然CCDC88A可以激活與化療耐藥相關(guān)的EGFR和PI3K通路，因此，有理由認(rèn)為CCDC88A可以促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的耐藥，從而影響腫瘤的預(yù)后。?

TOP2B（Gene?ID:?55704）屬于TOP2家族成員，這個(gè)家族還有TOP2A。TOP2是機(jī)體內(nèi)重要的核酶，具有調(diào)整DNA拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)的作用，它參與了DNA的復(fù)制、轉(zhuǎn)錄、翻譯及染色體的分離、損傷修復(fù)等過(guò)程。TOP2A在增殖細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞等含量較高，其濃度與細(xì)胞的增殖狀態(tài)緊密相關(guān)，快速增殖細(xì)胞是靜止細(xì)胞表達(dá)的數(shù)倍，G₀/G₁其含量較低，在S期開始增加，G₂/M期表達(dá)達(dá)到高峰。TOP2B的表達(dá)無(wú)細(xì)胞周期性差異，其濃度在細(xì)胞周期中保持相對(duì)恒定。因此推測(cè)TOP2A和TOP2B的功能，TOP2A可能負(fù)責(zé)在DNA復(fù)制后期解開兩個(gè)相互交聯(lián)的染色質(zhì)單體以及重組細(xì)胞分裂后期DNA；而TOP2B負(fù)責(zé)DNA復(fù)制、轉(zhuǎn)錄等過(guò)程。由于TOP2在細(xì)胞代謝中的重要作用，因此其成為腫瘤靶點(diǎn)被應(yīng)用到惡性腫瘤的治療中。這些抗TOP2的靶向藥物按照其作用方式可以分為兩種：TOP2毒劑和TOP2催化抑制劑。TOP2毒劑的代表藥物有依托泊苷（Etoposide，VP16）和阿霉素（Adriamycin，ADM），其作用方式是通過(guò)提高可切割復(fù)合物的穩(wěn)態(tài)濃度使TOP2從酶變成生理毒劑，形成TOP2-藥物-DNA復(fù)合物，使細(xì)胞基因組DNA斷裂，從而導(dǎo)致細(xì)胞變異或啟動(dòng)一系列事件導(dǎo)致細(xì)胞死亡。這些藥物是目前臨床上常用抗癌藥物，是淋巴瘤、肺癌等惡性腫瘤的首選藥物。TOP2催化抑制劑的代表藥物有新生霉素、阿柔比星等，其作用方式通過(guò)抑制催化反應(yīng)中的某一步驟或阻滯TOP2的某一特定功能，進(jìn)而抑制TOP2的總體催化活性。?

[發(fā)明內(nèi)容]

為了增加奧沙利鉑對(duì)于結(jié)腸癌細(xì)胞的敏感性，提供一種以CCDC88A和TOP2B作為新的靶點(diǎn)的奧沙利鉑藥物組合物。?

用MTT法檢測(cè)17種結(jié)直腸癌細(xì)胞系對(duì)奧沙利鉑敏感性，確定了奧沙利鉑對(duì)17株細(xì)胞的半致死濃度（IC50）和奧沙利鉑不敏感細(xì)胞株。通過(guò)篩選針對(duì)CCDC88A?mRNA的4個(gè)靶點(diǎn)的siRNA，選擇干擾效率最高的序列設(shè)計(jì)shRNA,?其堿基正向序列如SEQ?ID?NO:1所示，其堿基反向序列如SEQ　ID:2所示。?