[發明專利]二氫查耳酮的生物技術生產方法

有效

• 申請號: 201310325521.X
• 申請日: 2013-07-30
• 公開（公告）號: CN103571892B
• 公開（公告）日: 2019-07-12
• 發明（設計）人: 延斯-邁克爾·希爾默;埃貢·格羅斯;格哈德·克拉默爾;雅各布·彼得·萊伊;梅希特希爾德·高爾;烏韋·博恩朔伊爾;馬倫·湯姆森;克里斯廷·彼得斯;帕特里克·約恩齊克;薩沙·博伊特爾;托馬斯·舍佩爾
• 申請（專利權）人: 西姆萊斯有限公司
• 主分類號: C12P7/26
• 分類號: C12P7/26;C12N1/21;C12N1/19;C12N15/70;C12N15/81;C12R1/19;C12R1/865;C12R1/84
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 鄭斌;彭鯤鵬

給出了關于以下的描述：使用轉基因微生物生產二氫查耳酮尤其是根皮素的方法，所述轉基因微生物包含核酸區段(a)和/或核酸區段(a’)以及核酸區段(b)，所述核酸區段(a)包含編碼細菌查耳酮異構酶的基因或由其組成，所述核酸區段(a’)包含編碼植物查耳酮異構酶的基因或由其組成，所述核酸區段(b)包含編碼細菌烯醇還原酶(enoate reductase)的基因或由其組成；相應的轉基因微生物，其包含核酸區段(a)和/或核酸區段(a’)和/或核酸區段(b)，所述核酸區段(a)包含編碼細菌查耳酮異構酶的基因或由其組成，所述核酸區段(a’)包含編碼植物查耳酮異構酶的基因或由其組成，所述核酸區段(b)包含編碼細菌烯醇還原酶的基因或由其組成；以及宿主細胞，其包含一種或更多種相同或不同的這樣的載體。

本發明主要涉及使用轉基因微生物生產二氫查耳酮尤其是根皮素(phloretin)的方法，或者還原黃烷酮(flavanones)的方法，所述轉基因微生物包含核酸區段(a)和/或核酸區段(a’)以及核酸區段(b)，所述核酸區段(a)包含編碼細菌查耳酮異構酶的基因或由其組成，所述核酸區段(a’)包含編碼植物查耳酮異構酶的基因或由其組成，所述核酸區段(b)包含編碼細菌烯醇還原酶(enoate reductase)的基因或由其組成。

本發明還涉及這樣的轉基因微生物，其包含核酸區段(a)和/或核酸區段(a’)以及核酸區段(b)，所述核酸區段(a)包含編碼細菌查耳酮異構酶的基因或由其組成，所述核酸區段(a’)包含編碼植物查耳酮異構酶的基因或由其組成，所述核酸區段(b)包含編碼細菌烯醇還原酶的基因或由其組成。

本發明還涉及這樣的載體，尤其是質粒載體，其包含核酸區段(a)和/或核酸區段(a’)和/或核酸區段(b)，所述核酸區段(a)包含編碼細菌查耳酮異構酶的基因或由其組成，所述核酸區段(a’)包含編碼植物查耳酮異構酶的基因或由其組成，所述核酸區段(b)包含編碼細菌烯醇還原酶的基因或由其組成。

此外，本發明涉及這樣的宿主細胞，其包含一種或更多種相同或不同的根據本發明的載體。

根據下面的描述、實施例，尤其是所附權利要求，本發明的其他方面是顯而易見的。

二氫查耳酮(尤其是根皮素)通常通過查耳酮的化學還原或通過用二氫肉桂酸使酚發生傅-克酰基化(Friedel-Crafts acylation)來生產。該方法的缺點在于以該方式生產的食品添加劑、調味劑或芳香物質不能被描述為天然的。此外，可通過提取例如相應的糖苷(例如從蘋果屬(Malus spp.)原材料)隨后生成糖苷配基(aglycone)來得到二氫查耳酮，尤其是根皮素。然而，該工藝耗時且成本高，并且還依賴于季節。

具有二氫查耳酮結構的重要調味劑和芳香物質是例如根皮素(例如，根據EP1,998,636-B1)、根皮苷(phloridzin)、三葉苷(trilobatin)(參見Tanaka，T.；Yamasaki，K.；Kohda，H.；Tanaka，O.；Mahato，S.B.，Dihydrochalcone-glucosides as sweet principlesof Symplocos ssp.Planta Medica1980，(Suppl.)，81-83)、柚皮苷二氫查耳酮(naringindihydrochalcone)和新橙皮苷二氫查耳酮(neohesperidine dihydrochalcone)(Crosby，G.A.，New Sweeteners.Critical Reviews in Food Science and Nutrition1976，(June)，297-323)。

由于現在需要并且未來也需要有利的二氫查耳酮，尤其是根皮素，所以本發明的主要問題是提供可以以工業規模用于生產二氫查耳酮尤其是根皮素的有效且優選節約成本的方法。

另一個問題是提供用于實施這種方法的合適的或必需的手段。

根據下面的描述，尤其是所附權利要求，本發明的其他問題是顯而易見的。