[發(fā)明專利]二氫查耳酮的生物技術(shù)生產(chǎn)方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310325521.X
• 申請日: 2013-07-30
• 公開（公告）號: CN103571892B
• 公開（公告）日: 2019-07-12
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 延斯-邁克爾·希爾默;埃貢·格羅斯;格哈德·克拉默爾;雅各布·彼得·萊伊;梅希特希爾德·高爾;烏韋·博恩朔伊爾;馬倫·湯姆森;克里斯廷·彼得斯;帕特里克·約恩齊克;薩沙·博伊特爾;托馬斯·舍佩爾
• 申請（專利權(quán)）人: 西姆萊斯有限公司
• 主分類號: C12P7/26
• 分類號: C12P7/26;C12N1/21;C12N1/19;C12N15/70;C12N15/81;C12R1/19;C12R1/865;C12R1/84
• 代理公司: 北京集佳知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11227
• 代理人: 鄭斌;彭鯤鵬

1.一種使用不是細枝真桿菌(Eubacterium ramulus)的轉(zhuǎn)基因微生物生產(chǎn)二氫查耳酮的方法，其包括以下步驟：

(i)提供轉(zhuǎn)基因微生物，其包含

-核酸區(qū)段(a)，所述核酸區(qū)段(a)包含編碼細菌查耳酮異構(gòu)酶的基因或由其組成，

和/或核酸區(qū)段(a’)，所述核酸區(qū)段(a’)包含編碼植物查耳酮異構(gòu)酶的基因或由其組成，

和

-核酸區(qū)段(b)，所述核酸區(qū)段(b)包含編碼細菌烯醇還原酶的基因或由其組成；

(ii)將一種或更多種黃烷酮和/或所述黃烷酮的一種或更多種前體添加到所述轉(zhuǎn)基因微生物中，以及在允許所述黃烷酮和/或其前體轉(zhuǎn)化為二氫查耳酮的條件下培養(yǎng)所述轉(zhuǎn)基因微生物；

(iii)任選地：分離并且可能地純化所述二氫查耳酮，

其中所述二氫查耳酮是根皮素，和/或其中所述黃烷酮是柚皮素。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述轉(zhuǎn)基因微生物是兼性厭氧微生物。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述轉(zhuǎn)基因微生物是酵母。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其中所述轉(zhuǎn)基因微生物不是梭菌(Clostridiales)目的微生物。

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其中所述轉(zhuǎn)基因微生物不是梭菌(Clostridia)綱的微生物。

6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其中所述轉(zhuǎn)基因微生物不是厚壁菌(Firmicutes)門的微生物。

7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其中所述轉(zhuǎn)基因微生物是兼性需氧細菌。

8.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其中所述轉(zhuǎn)基因微生物是變形菌。

9.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其中所述轉(zhuǎn)基因微生物是腸細菌。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其中所述腸細菌是埃希氏桿菌屬。

11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其中所述埃希氏桿菌屬選自大腸桿菌(E.coli)。

12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的方法，其中所述大腸桿菌是大腸桿菌Rosetta、大腸桿菌BL21和大腸桿菌SE1。

13.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其中所述酵母是釀酒酵母(S.cerevesiae)和巴斯德畢赤酵母(P.pastoris)。

14.根據(jù)權(quán)利要求1至13中任一項所述的方法，其中在步驟(ii)中添加柚皮苷和/或其糖苷配基。

15.根據(jù)權(quán)利要求1至13中任一項所述的方法，其中

編碼細菌查耳酮異構(gòu)酶的所述基因編碼來自厚壁菌門的微生物的查耳酮異構(gòu)酶，

和/或

編碼植物查耳酮異構(gòu)酶的所述基因編碼來自擬南芥(A.thaliana)或紫花苜蓿(M.sativa)的查耳酮異構(gòu)酶，

和/或

編碼細菌烯醇還原酶的所述基因編碼來自厚壁菌門的微生物的烯醇還原酶。

16.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中編碼細菌查耳酮異構(gòu)酶的所述基因編碼來自梭菌綱的微生物的查耳酮異構(gòu)酶。

17.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中編碼細菌查耳酮異構(gòu)酶的所述基因編碼來自梭菌目的微生物的查耳酮異構(gòu)酶。

18.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中編碼細菌查耳酮異構(gòu)酶的所述基因編碼來自細枝真桿菌的查耳酮異構(gòu)酶。